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含有３－磷酸甘油酸激酶基因（ＰＧＫ１）的酿酒酵母染色体３．１ｋｂ ＨｉｎｄⅢ片段，已被克隆在大肠杆菌－酵母菌穿梭载体ｐＣＮ６０上。ＫｐｎⅠ核酸内切酶在ｐＣＮ６０上没有酶切位点，而在ｐＣＮ６０（ＰＧＫ１）上仅有一个酶切位点。用此酶将ｐＣＮ６０（ＰＧＫ１）质粒完全酶切，再用Ｂａｌ３１从两端逐步消解碱基对，使反应终止于每端消解５００ｂｐ左右，加上ＥｃｏＲⅠ ｌｉｎｋｅｒ，用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ酶切，分