【摘 要】
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目的排除样品中高浓度活菌和大量辅料及死菌DNA的干扰,检测地衣芽孢杆菌活菌胶囊中金黄色葡萄球菌。方法将叠氮溴化丙锭（PMA）、实时荧光定量PCR（qPCR）和微孔膜过滤法相结合,收集滤液后离心,富集菌体,优化PMA工作浓度、暗孵育时间和曝光时间,确定PMA最佳处理方案。采用不同浓度金黄色葡萄球菌的死菌与活菌进行PMA-qPCR方法验证,同时考察方法灵敏度和特异性。结果样品采用5.0μm的聚醚砜膜过
【基金项目】
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浙江省基础公益研究计划项目资助（LGC19H300001）；
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目的排除样品中高浓度活菌和大量辅料及死菌DNA的干扰,检测地衣芽孢杆菌活菌胶囊中金黄色葡萄球菌。方法将叠氮溴化丙锭（PMA）、实时荧光定量PCR（qPCR）和微孔膜过滤法相结合,收集滤液后离心,富集菌体,优化PMA工作浓度、暗孵育时间和曝光时间,确定PMA最佳处理方案。采用不同浓度金黄色葡萄球菌的死菌与活菌进行PMA-qPCR方法验证,同时考察方法灵敏度和特异性。结果样品采用5.0μm的聚醚砜膜过滤,辅料截留率和滤液活菌计数最高。PMA工作质量浓度40μg·mL-1,暗孵育时间10 min,曝光时间10 min为最佳处理方案,该处理方案下PMA既不影响活菌DNA的PCR扩增,又能进入死菌中结合DNA抑制其扩增。本法高效快速、实时准确,全过程筛选鉴定只需4 h,最低检测限为1×104 CFU·mL-1。结论本法灵敏度高、特异性强,适用于地衣芽孢杆菌活菌制品中金黄色葡萄球菌的检测。
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