结核分枝杆菌H37Rv ORF的高通量克隆和表达方法的建立

来源 :中国兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seed_sg
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以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,采用Gateway重组表达系统,以基因长度200~2500 bp为标准,选择目的基因(n=384),以ORF的保守序列设计引物并加上正反向AttB,通过PCR扩增获得基因片段检测入门克隆,得到的克隆有效率为374/384。通过两次同源重组,这些基因片段被克隆到表达载体中,克隆效率为350/384。随后将这些重组表达质粒分别在2个表达菌株BL21和BL21-codonplus-RP中进行诱导表达,表达得率为270/384,并对其中64个进行了纯化,16个是可溶性表达。这
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