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【摘要】 目的 探讨胃癌中FHIT和β-Catenin的表达相关性及其与胃癌发展之间的关系。方法 应用免疫组化法检测50例胃癌组织、10例胃良性病变组织标本中FHIT和β-Catenin表达。结果 胃癌组织FHIT和β-Catenin的阳性表达率分别为22.00%和78.00%。FHIT在胃癌组织中表达缺失，与浸润深度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关（P>0.05）。β-Catenin在胃癌组织中高表达与浸润深度、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。癌组织中FHIT和β-Catenin的表达呈负相关（r=-0.358，P=0.011）。结论 FHIT和β-Catenin在胃癌中表达成显著负相关，提示两者在胃癌的发生发展中可能存在重要的协同作用。
【关键词】 FHIT； β-Catenin； 胃癌； 免疫组织化学
Study on the Expression and Correlation of FHIT and β-Catenin in Gastric Carcinoma YOU Li-guang, XU Ya-dong, LI Xin-lei,et al. The Fifth Clinical Hospital of Harbin Medical University, Daqing 163318, China
【Abstract】 Objective To investigate the correlation of the expression of FHIT andβ-Catenin proteins and study its role in the development of gastric carcinoma.Methods The expression of FHIT and β-Catenin proteins was detected by SP immunohistochemical technique in 50 cases of gastric carcinoma，10 cases of benigh gastric lesions in tissue samples.Results The positive rates of FHIT andβ-Catenin proteins were 22.80% and 82.46% respectively in gastric carcinoma. Reduction of FHIT had no relation to the sex or age of the patients, sizes of tumors and tumor differentiation(P>0.05). The expression of FHIT was closely related to the depth of tumors and lymph node metastasis(P<0.05). The expression of β-Catenin was not related to the sex or age of the patients (P>0.05). The expression of β-Catenin was closely related to the depth of tumors, sizes of tumors , tumor differentiation and lymph node metastasis(P<0.05). The expression of FHIT protein had a significant negative correlation with that of β-Catenin protein in gastric carcinoma(r=-0.358,P=0.011).Conclusion There is a significant negative correlation between high expressions of FHIT andβ-Catenin proteins in gastric carcinoma. The high expressions of FHIT andβ-Catenin proteins are possibly related to the development and metastasis of gastric carcinoma.
【Key words】 FHIT; β-Catenin; Gastric carcinoma; Immunohistochemistry
细胞癌变是多因素、多阶段、多基因变异的结果。脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad, FHIT）表达频繁地降低或缺失，在细胞增殖、转化及肿瘤发生中具有十分重要的作用［1,2］。Wnt信号转导通路致癌的关键是β-Catenin降解障碍并与Tcf-lef结合进入胞核，激活下游靶基因引起细胞增殖和分化失控导致肿瘤发生［3］。已知两种基因与胃癌的发生发展密切相关，但两者在胃癌中表达的相关性尚未见报道。本研究旨在探讨FHIT和β-Catenin的表达相关性及其与胃癌发生发展的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 标本随机取自哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理科2004～2005年存档胃癌组织蜡块50例和胃良性病变组织蜡块10例。所有材料均经福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片，常规染色后，复核病理诊断，并按WHO标准分型、分级。其中高中分化腺癌20例，低未分化腺癌30例，胃良性病变组织10例；癌组织直径＜5 cm 21例，≥5 cm 29例；其中男35例，女15例，男女比为2.33∶1；年龄42～83岁，中位年龄61岁。所有病例均有淋巴结转移情况记录，其中转移者30例。浸润深度至黏膜或黏膜下及至肌层17例，浸润至浆膜及穿透浆膜层33例。所有病例术前均未接受放疗、化疗。
1.2 试剂及染色法 β-Catenin多克隆抗体及链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化染色试剂盒均为美国Santa Cruz公司产品；FHIT多克隆抗体和Envision试剂盒均为Zymed公司产品。均购自北京中山生物技术有限公司。用免疫组化SP法，将已知阳性的胃癌切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定 FHIT阳性反应产物呈棕黄色颗粒状，定位在细胞浆中。β-Catenin阳性物质呈棕黄色，定位于细胞膜，即连续的细胞膜染色。参照有关文献［4］，每张切片随机选取10个高倍视野，每个高倍视野计数100个癌细胞，计算阳性细胞百分率，结果判定采用盲法，并由病理科医师对染色结果复阅核定。判定标准：（1）阴性（-）：阳性细胞数＜5%；（2）弱阳性（+）：阳性细胞数在5%～25%之间，染色淡；（3）中度阳性（++）：阳性细胞数26%～50%之间，染色清晰；（4）强阳性（+++）：阳性细胞数＞50%，染色强。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行分析，组间比较采用χ2检验及Fisher确切概率法，相关性分析采用Spearman等级相关分析，结果均以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 FHIT和β-Catenin在胃癌和胃良性病变组织中的表达 50例胃癌标本中，FHIT阳性表达11例，阳性率22.00%；β-Catenin阳性表达42例，阳性率84.00%。10例良性病变胃组织标本中FHIT全部阳性表达，β-Catenin全部阴性表达。两组标本中的FHIT和β-Catenin表达差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 FHIT和β-Catenin表达与胃癌临床病理特征的关系 FHIT在胃癌组织中表达缺失，与浸润深度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关（P>0.05）。β-Catenin在胃癌组织中高表达与浸润深度、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。见表2。
2.3 胃癌组织中FHIT和β-Catenin表达的相关性 由表3可见，50例胃癌组织中，Spearman 等级相关分析显示FHIT和β-Catenin表达呈负相关（r=-0.358，P=0.011）。
3 讨论
FHIT基因是于1996年首次克隆出的一个新的候选抑癌基因，其定位于染色体3p14.2，跨越人类基因组中一个最普遍的脆性位点FRA3B及肾细胞癌相关性断裂点t。大量研究表明，FHIT基因在胃癌等肿瘤中均存在异常。本实验研究发现，FHIT在胃癌组织中表达缺失，与浸润深度和淋巴结转移关系密切，与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关。Wnt信号传导通路与肿瘤的发生发展密切相关，而β-catenin是这条通路中的核心因子，介导细胞与细胞之间的黏附［5］。当Wnt信号蛋白与细胞膜上的受体蛋白结合后活化
细胞内蛋白Dishevelled（Dsh），Dsh的活化抑制了糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β, GSK-3β）的功能，使其不能磷酸化β-catenin，抑制了的β-catenin蛋白降解导致细胞浆内游离的β-catenin增加，促进下游靶基因的表达。研究表明，β-Catenin在胃癌组织中高表达与浸润深度、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切，与患者的性别、年龄无关。
两者在胃癌中的相关性尚未见报道。本实验中50例胃癌组织中有FHIT大量表达缺失，同时β-catenin高表达，呈明显的负相关（r=-0.358,P=0.011），提示两者在胃癌的发生发展中可能存在重要的协同作用，两者的联合检测可能对胃癌的诊治及预后有重要意义，可能会成为胃癌的靶向治疗的新目标，还需进一步的研究来探讨两基因间的具体作用机制。
参 考 文 献
［1］ Lee YC, Wu CT, Shih JY, et al. Frequent allelic deletion at the FHIT locus assosiate with p53 overexpression in squamous cell carcinoma subtype of Taiwanese non-small-cell lung cancers ［J］. Br J Cancer,2004,90(12):2378-2383.
［2］ Pekarsky Y, Palamarchuk A, Huebner K, et al. FHIT as tumou supperssor: mechanisms and therapeutic opportunitiesp［J］. Cancer Biol Ther,2002,1(3):232-236.
［3］ Kikuchi A. Regulation of beta-catenin signaling in the Wnt pathway［J］. Biochem Biophys Res Commun,2000,268(2):243.
［4］ Hao XP, Willis JE, Pretlow TG, et al. Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and prem alignant lesions［J］. Cancer Res,2000,60(1):18-21.
［5］ Karim R, Tse G, Putti T, et al. The significance of the Wnt pathway in the pathology of human cancers［J］. Pathology,2004,36:120-128.
（收稿日期：2011-10-21）
（本文编辑：王宇）
【关键词】 FHIT； β-Catenin； 胃癌； 免疫组织化学
Study on the Expression and Correlation of FHIT and β-Catenin in Gastric Carcinoma YOU Li-guang, XU Ya-dong, LI Xin-lei,et al. The Fifth Clinical Hospital of Harbin Medical University, Daqing 163318, China
【Abstract】 Objective To investigate the correlation of the expression of FHIT andβ-Catenin proteins and study its role in the development of gastric carcinoma.Methods The expression of FHIT and β-Catenin proteins was detected by SP immunohistochemical technique in 50 cases of gastric carcinoma，10 cases of benigh gastric lesions in tissue samples.Results The positive rates of FHIT andβ-Catenin proteins were 22.80% and 82.46% respectively in gastric carcinoma. Reduction of FHIT had no relation to the sex or age of the patients, sizes of tumors and tumor differentiation(P>0.05). The expression of FHIT was closely related to the depth of tumors and lymph node metastasis(P<0.05). The expression of β-Catenin was not related to the sex or age of the patients (P>0.05). The expression of β-Catenin was closely related to the depth of tumors, sizes of tumors , tumor differentiation and lymph node metastasis(P<0.05). The expression of FHIT protein had a significant negative correlation with that of β-Catenin protein in gastric carcinoma(r=-0.358,P=0.011).Conclusion There is a significant negative correlation between high expressions of FHIT andβ-Catenin proteins in gastric carcinoma. The high expressions of FHIT andβ-Catenin proteins are possibly related to the development and metastasis of gastric carcinoma.
【Key words】 FHIT; β-Catenin; Gastric carcinoma; Immunohistochemistry
细胞癌变是多因素、多阶段、多基因变异的结果。脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad, FHIT）表达频繁地降低或缺失，在细胞增殖、转化及肿瘤发生中具有十分重要的作用［1,2］。Wnt信号转导通路致癌的关键是β-Catenin降解障碍并与Tcf-lef结合进入胞核，激活下游靶基因引起细胞增殖和分化失控导致肿瘤发生［3］。已知两种基因与胃癌的发生发展密切相关，但两者在胃癌中表达的相关性尚未见报道。本研究旨在探讨FHIT和β-Catenin的表达相关性及其与胃癌发生发展的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 标本随机取自哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理科2004～2005年存档胃癌组织蜡块50例和胃良性病变组织蜡块10例。所有材料均经福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片，常规染色后，复核病理诊断，并按WHO标准分型、分级。其中高中分化腺癌20例，低未分化腺癌30例，胃良性病变组织10例；癌组织直径＜5 cm 21例，≥5 cm 29例；其中男35例，女15例，男女比为2.33∶1；年龄42～83岁，中位年龄61岁。所有病例均有淋巴结转移情况记录，其中转移者30例。浸润深度至黏膜或黏膜下及至肌层17例，浸润至浆膜及穿透浆膜层33例。所有病例术前均未接受放疗、化疗。
1.2 试剂及染色法 β-Catenin多克隆抗体及链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化染色试剂盒均为美国Santa Cruz公司产品；FHIT多克隆抗体和Envision试剂盒均为Zymed公司产品。均购自北京中山生物技术有限公司。用免疫组化SP法，将已知阳性的胃癌切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定 FHIT阳性反应产物呈棕黄色颗粒状，定位在细胞浆中。β-Catenin阳性物质呈棕黄色，定位于细胞膜，即连续的细胞膜染色。参照有关文献［4］，每张切片随机选取10个高倍视野，每个高倍视野计数100个癌细胞，计算阳性细胞百分率，结果判定采用盲法，并由病理科医师对染色结果复阅核定。判定标准：（1）阴性（-）：阳性细胞数＜5%；（2）弱阳性（+）：阳性细胞数在5%～25%之间，染色淡；（3）中度阳性（++）：阳性细胞数26%～50%之间，染色清晰；（4）强阳性（+++）：阳性细胞数＞50%，染色强。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行分析，组间比较采用χ2检验及Fisher确切概率法，相关性分析采用Spearman等级相关分析，结果均以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 FHIT和β-Catenin在胃癌和胃良性病变组织中的表达 50例胃癌标本中，FHIT阳性表达11例，阳性率22.00%；β-Catenin阳性表达42例，阳性率84.00%。10例良性病变胃组织标本中FHIT全部阳性表达，β-Catenin全部阴性表达。两组标本中的FHIT和β-Catenin表达差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 FHIT和β-Catenin表达与胃癌临床病理特征的关系 FHIT在胃癌组织中表达缺失，与浸润深度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关（P>0.05）。β-Catenin在胃癌组织中高表达与浸润深度、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切（P<0.05），与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。见表2。
2.3 胃癌组织中FHIT和β-Catenin表达的相关性 由表3可见，50例胃癌组织中，Spearman 等级相关分析显示FHIT和β-Catenin表达呈负相关（r=-0.358，P=0.011）。
3 讨论
FHIT基因是于1996年首次克隆出的一个新的候选抑癌基因，其定位于染色体3p14.2，跨越人类基因组中一个最普遍的脆性位点FRA3B及肾细胞癌相关性断裂点t。大量研究表明，FHIT基因在胃癌等肿瘤中均存在异常。本实验研究发现，FHIT在胃癌组织中表达缺失，与浸润深度和淋巴结转移关系密切，与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关。Wnt信号传导通路与肿瘤的发生发展密切相关，而β-catenin是这条通路中的核心因子，介导细胞与细胞之间的黏附［5］。当Wnt信号蛋白与细胞膜上的受体蛋白结合后活化
细胞内蛋白Dishevelled（Dsh），Dsh的活化抑制了糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β, GSK-3β）的功能，使其不能磷酸化β-catenin，抑制了的β-catenin蛋白降解导致细胞浆内游离的β-catenin增加，促进下游靶基因的表达。研究表明，β-Catenin在胃癌组织中高表达与浸润深度、肿瘤大小及分化程度和淋巴结转移关系密切，与患者的性别、年龄无关。
两者在胃癌中的相关性尚未见报道。本实验中50例胃癌组织中有FHIT大量表达缺失，同时β-catenin高表达，呈明显的负相关（r=-0.358,P=0.011），提示两者在胃癌的发生发展中可能存在重要的协同作用，两者的联合检测可能对胃癌的诊治及预后有重要意义，可能会成为胃癌的靶向治疗的新目标，还需进一步的研究来探讨两基因间的具体作用机制。
参 考 文 献
［1］ Lee YC, Wu CT, Shih JY, et al. Frequent allelic deletion at the FHIT locus assosiate with p53 overexpression in squamous cell carcinoma subtype of Taiwanese non-small-cell lung cancers ［J］. Br J Cancer,2004,90(12):2378-2383.
［2］ Pekarsky Y, Palamarchuk A, Huebner K, et al. FHIT as tumou supperssor: mechanisms and therapeutic opportunitiesp［J］. Cancer Biol Ther,2002,1(3):232-236.
［3］ Kikuchi A. Regulation of beta-catenin signaling in the Wnt pathway［J］. Biochem Biophys Res Commun,2000,268(2):243.
［4］ Hao XP, Willis JE, Pretlow TG, et al. Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and prem alignant lesions［J］. Cancer Res,2000,60(1):18-21.
［5］ Karim R, Tse G, Putti T, et al. The significance of the Wnt pathway in the pathology of human cancers［J］. Pathology,2004,36:120-128.
（收稿日期：2011-10-21）
（本文编辑：王宇）