【摘 要】
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目的 观察Notch1通路活化对胶质瘤干细胞(GSCs)迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在机制. 方法 将U87胶质瘤细胞置于干细胞培养基中悬浮培养,使用免疫磁珠法分选获得CD133阳性
【机 构】
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天津医科大学总医院神经外科, 天津,300052
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目的 观察Notch1通路活化对胶质瘤干细胞(GSCs)迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在机制. 方法 将U87胶质瘤细胞置于干细胞培养基中悬浮培养,使用免疫磁珠法分选获得CD133阳性的胶质瘤细胞,免疫荧光染色检测CD133及巢蛋白鉴定GSCs.将携带Notch1抑制物核苷酸序列(shRNA-Notch1)、阴性对照核苷酸序列(shRNA-NC)的重组慢病毒转染至体外培养的U87来源的GSCs中,分别作为shRNA-Notch1组、shRNA-NC组,同时设不做处理的空白对照组,在成球后行通过荧光定量PCR检测3组细胞Notch1 mRNA的表达;Western blotting检测3组细胞Notch1、Hes1、Akt、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白的表达;Transwell细胞迁移和侵袭实验观察3组细胞迁移和侵袭能力的强弱. 结果 免疫荧光染色检测显示肿瘤细胞球阳性表达神经干细胞标志物CD133和巢蛋白.与shRNA-NC组和空白对照组相比,shRNA-Notch1组GSCs的Notch1 mRNA和蛋白、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而Akt蛋白水平没有明显变化,差异无统计学意义(P>.05).Transwell迁移及侵袭实验均显示与shRNA-NC组和空白对照组相比,shRNA-Notch1组穿膜的细胞数目降低,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 抑制Notch1通路活性后可能通过PI3K通路来调节GSCs的迁移和侵袭能力.
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