【摘 要】
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用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗
【机 构】
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中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南大学农学院．海南儋州571737,中山大学基因工程教育部重点实验室／生物化学系
【基金项目】
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国家“863”项目（No.2007AA021307）,中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目（No.ITBBZX2008-4-2）资助.
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用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L。其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。
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