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采用琼脂扩散法，以酸奶常见腐败真菌（黄曲霉、马克思克鲁维酵母、季也蒙毕赤酵母）为指示菌，从140株乳杆菌中筛选出了1株抑菌效果明显的菌株F32-2，经过16SrDNA鉴定为鼠李糖乳杆菌。将F32-2作为辅助发酵剂应用于酸奶生产和防腐保鲜，对贮藏期酸奶的感官和理化性质进行测定，评价F32-2在酸奶中的生物防腐效果。结果表明：添加F32-2缩短了酸奶发酵时间，提高了乳杆菌总数，在贮藏后期延缓了酸奶后酸化，对酸奶的感官品质无负面影响；在4 ℃贮藏28天，实验组对马克思克鲁维酵母菌的抑制率最高达到了66.09%；在常温贮藏条件下，接种L.rhamnosusF32-2的酸奶能有效抑制酸奶中霉菌生长，货架期延长至28d以上。鼠李糖乳杆菌F32-2可以作为酸奶辅助发酵剂应用于酸奶生产。