草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ的融合表达、纯化和抗血清制备

来源 :水产学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dalang003

【摘要】

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采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)cDNA,使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX-4T-1载体中,构建草鱼IGF-Ⅰ融合蛋白表达质粒pGEX-IGF.质粒转化大肠杆菌

【作者】

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叶星白俊杰劳海华简清李英华罗建仁

【机构】

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中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室

【出处】

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水产学报

【发表日期】

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2004年期

【关键词】

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草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ 融合表达纯化抗血清

【基金项目】

：

农业部重点渔业科技基金;

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采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)cDNA,使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX-4T-1载体中,构建草鱼IGF-Ⅰ融合蛋白表达质粒pGEX-IGF.质粒转化大肠杆菌BL21菌株.该菌株经IPTG诱导可表达分子量约34kD的特异蛋白.在不同的温度条件下分别产生以可溶性的和包涵体形式为主的特异蛋白.经30℃诱导的菌体经溶菌酶消化、超声破碎及高速离心后,裂解液上清经glutathionesepharose亲和层析纯化获得高纯度的GST-IGF.以此纯化的融合蛋白为抗原制备兔抗草鱼IGF-Ⅰ的抗血清.凝胶双扩散试验显示抗血清效价为1:64,说明表达产物具免疫原性.

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