目的 观察促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后对醛固酮和皮质醇的调控影响,并探讨类固醇生成因子-1(SF-1)基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用慢病毒包装携带SF-1特异性短发夹RNA(shRNA)序列的载体pLVX-shRNA-SF-1,同时设立阴性及空白对照组,转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,转染后48 h应用Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测SF-1表达水平.设置100 nmol/L ACTH刺激实验组和对照组细胞,检测刺激1h后类固醇急性调节蛋白(StAR) mRNA表达水平,检测刺激48 h后醛固酮合成酶CYP11B2和皮质醇合成酶CYP11B1 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定同时期醛固酮和皮质醇激素的含量,比较两组细胞醛固酮和皮质醇增幅.结果 实验组细胞SF-1在蛋白水平和mRNA水平分别下降了69％和71％ (P＜0.05).ACTH刺激1h时实验组比对照组StARmRNA表达水平升高1.4倍,两组细胞醛固酮水平分别为(91.59 ±4.28)和(79.90±2.41) ng/L(P＜0.05),但皮质醇水平分别为(23.72±1.50)和(23.74±1.40) ng/L(P ＞0.05).刺激48 h时实验组CYP11B2基因表达水平是对照组细胞的13倍,但醛固酮表达含量分别为(129.50 ±6.87)、(131.52 ±7.56) ng/L(P＞0.05);实验组CYB11 B1 mRNA表达水平仅为对照组细胞的1.18倍(P＞0.05),但皮质醇含量为(28.95 ±1.51)和(33.08±1.67) ng/L(P＜0.05).两种激素在ACTH刺激后对比各自增幅,对照组分别为实验组的1.37倍和1.80倍(P＜0.05).结论 SF-1表达下调可以降低醛固酮和皮质醇对ACTH的敏感性和反应性。
类固醇生成因子-1表达下调在介导促肾上腺皮质激素对H295R细胞醛固酮和皮质醇急慢性分泌调控中的作用
【摘 要】
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目的 观察促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后对醛固酮和皮质醇的调控影响,并探讨类固醇生成因子-1(SF-1)基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用慢病毒包装携带SF-1特异性短发夹RNA(shRNA)序列的载体pLVX-shRNA-SF-1,同时设立阴性及空白对照组,转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,转染后48 h应用Western blot和实时定量聚合酶链反应(Re
【机 构】
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【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2014年31期
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