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背景:血管壁机械性损伤后的炎症和增殖效应是血管再狭窄的主要原因.核因子κB/Rel家族中的核因子κB在多种细胞类型中表达,激活一系列与血管壁病理生理相关的靶基因.目的:探讨核因子κB的反义和诱骗性寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜和单核细胞化学趋化因子的作用.设计:随机对照动物实验.单位:上海交通大学医学院附属瑞金医院心内科.材料:3个月龄雄性SD大鼠126只,350～380 g.引物合成和寡核苷酸合成:根据文献及国际互联网cDNA文库检索、设计,由上海生物工程公司合成;寡核苷酸合成:全硫代修饰,由上海生物工程有限公司合成.方法:实验于2001-05/2003-03在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和瑞金医院心血管实验室完成.采用贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,实验选用3～5代血管平滑肌细胞.检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原和核因子κB蛋白水平.制作大鼠血管球囊损伤模型.SD大鼠随机分为7组,正常组:除球囊损伤外,其余手术操作同其他组相同;反义组;正义组;诱骗组;Scramble组;反义+诱骗组;模型组.每组分为6个时相点(6 h,1,3,5,7,14 d),每个时相点3只大鼠.检测血管球囊损伤后新生内膜形成以及单核细胞化学趋化因子1、核因子κB p65和ERK2的表达水平.主要观察指标:①核因子κB p65寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的效应.②核因子κB p65基因表达定位和蛋白合成.③大鼠颈动脉球囊损伤后病理形态学改变.④单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达.⑤免疫组织化学检测球囊损伤后血管壁单核细胞化学趋化因子1的蛋白质表达.⑥Western blot检测球囊损伤后血管壁核因子κB p65,ERK2的蛋白合成.结果:①增殖的平滑肌细胞内增殖标记物增殖细胞核抗原表达增加.②增殖的平滑肌细胞浆、细胞核内均有核因子κB p65的基因表达;核因子κB p65蛋白水平增加.观察核因子κB p65基因表达水平,反义核酸组较对照正义组降低53.66%,诱骗性寡核苷酸组较诱骗对照组降低57.35%,差异均有统计学意义(P＜0.05).③核因子κB反义和诱骗寡核苷酸抑制增殖细胞核抗原表达,较阳性对照组分别降低45.12%,45.05%.④大鼠血管球囊损伤后第5天,正义组、诱骗对照组、模型组内膜面积、中膜面积、内膜/中膜比值显著升高(P＜0.05),7 d后达到高峰.反义组、诱骗组显著降低内膜与中膜比值,反义+诱骗组较单独应用无统计学意义的降低效应.⑤反转录-聚合酶链反应显示球囊损伤后6 h,单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达明显增加,1 d后表达减少,3,5,7 d单核细胞化学趋化因子1 mRNA持续而明显的表达增强,14 d后略为降低.反义组、诱骗组、反义+诱骗组在各时间点均能减少单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达.⑥Western Blot检测显示血管球囊损伤后6 h,核因子κB p65、ERK2蛋白表达微弱,1 d后ERK2蛋白表达略增强,核因子κB的蛋白合成明显增强.7 d后p65,ERK2的蛋白合成达到高峰.第14天,ERK2与p65的蛋白合成较第7天减弱.反义组、诱骗组、反义+诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱.结论:增殖的平滑肌细胞核因子κB p65基因表达增加,核因子κB调控单核细胞化学趋化因子1的基因表达和蛋白质水平.血管球囊损伤后,血管平滑肌细胞增殖有动态性变化.局部转染核因子κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制所调控靶基因表达.