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摘 要：本文对阿莫西林胶囊中高分子杂质的含量测定方法进行研究。固定相为：葡聚糖凝胶G-10（40-120um）为填充剂，玻璃柱内径1.0-1.4cm，柱长30-40cm；pH值为8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液[0.05mol/L磷酸氢二钠-0.05mol/L磷酸二氢钠（95：5）]为A流动相，水为B流动相；检测波长为254nm；流速1.5mL·min-1，柱温：30℃。此方法简便、准确、重现性好，可用于阿莫西林胶囊中高分子杂质的含量测定。
关键词：阿莫西林胶囊；高分子杂质；含量
阿莫西林，又名安莫西林或安默西林，是一种最常用的半合成青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素。阿莫西林杀菌作用强，穿透细胞膜的能力也强。在临床上最常见的不良反应是速发型过敏反应。引发β-内酰胺抗生素速发型过敏反应的过敏原并不是β-内酰胺抗生素本身，而是其中存在的高分子聚合物。高分子聚合物具有强的抗原性质，在临床过敏反应中起重要作用。高分子杂质：高分子杂质是对药品中分子量大于药物本身的杂质总称。临床应用阿莫西林的不良反应发生率约为5-6%，其主要不良反应有：药物热、荨麻疹、皮疹、哮喘、过敏性休克、白细胞减少、血小板减少、腹泻、恶心、呕吐、滲出性多形性红斑、Lyell综合征、肝功能紊乱、肾功能紊乱、剥脱性皮炎、焦虑、失眠、头晕以及行为异常等中枢神经系统症状等[1-6]。凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。本文采用高校液相测定了阿莫西林胶囊中高分子杂质的含量。
1 仪器与试药
6000LDI高效液相色谱仪（天津琛航科苑科技发展有限公司）；UV1902双光束紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；赛多利斯Cubis？高端天平（德国赛多利斯集团）；OHAUS 奥豪斯 STARTER 3100 PH计（上海泉佰仪器有限公司）；ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；JULABO TW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京）有限公司）。
RE-52A实验室旋转蒸发器（上海比朗仪器有限公司）；SHB-（III）循环水式真空泵（上海楚柏实验室设备有限公司）；博翔兴旺80KHZ 高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）；实验室高纯水系统Aquelix 5（广州艾威仪器科技有限公司）。磷酸（济宁百川化工有限公司）、磷酸氢二钠（启东市名成化工有限公司）、冰醋酸（济宁百川化工有限公司）、乙腈（启东市名成化工有限公司）、甲醇（启东市名成化工有限公司）、磷酸二氢钠（济宁百川化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。固定相为：葡聚糖凝胶G-10（40-120um）为填充剂，玻璃柱内径1.0-1.4cm，柱长30-40cm；pH值为8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液[0.05mol/L磷酸氢二钠-0.05mol/L磷酸二氢钠（95：5）]为A流动相，水为B流动相；检测波长为254nm；流速1.5mL·min-1，柱温：30℃。理论板数按蓝色葡聚糖2000峰计算应不得低于500。拖尾因子应小于2.0.在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93-1.07之间，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值均应在0.93-1.07之间。取阿莫西林约0.2克至于10毫升容量瓶内，加加2%无水碳酸钠溶液4毫升超声溶解，用0.3mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取100μL注入色谱仪中，用A流动相检测，高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0。
2.2 测定方法
精密量取供试品溶液100μL注入色谱仪，以A流动相检测，记录色谱图。另精密量取对照品溶液100μL注入色谱仪，以B流动相检测。按外标法以青霉素峰面积计算，并乘以矫正因子0.2，计算阿莫西林胶囊聚合物的量。
2.3 蓝色葡聚糖2000溶液的制备
精密称取蓝色葡聚糖2000对照品约10mg，用水溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为蓝色葡聚糖200溶液。
2.4 0.3mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液的制备
精密称取蓝色葡聚糖2000对照品约10mg，用水溶解并稀释成每1ml中含0.3mg的溶液，作为0.3mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液。
2.5 供试品溶液的制备
取阿莫西林胶囊内容物，精密称取5克，至于20毫升容量瓶内，加2%无水碳酸钠溶液8毫升超声溶解，加水至刻度，摇匀，过滤，即得（临用前新配）。
2.6 对照品溶液的制备
精密称取青霉素对照品约10mg，用水溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.7 阴性溶液的制备
依照处方取阿莫西林胶囊辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在高分子杂质出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.8 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取对照品溶液100μL重复进样5次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.93%。结果表明，本实验精密度良好。
2.9 重现性试验
分别称取同批阿莫西林胶囊样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.91%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定阿莫西林胶囊三批样品中高分子杂质的含量，含量0.05%、0.06%、0.05%。
参考文献
[1]鄢清元，徐俐瑜，雷招宝.阿莫西林与阿莫西林/克拉维酸钾致不良反应差异分析[J].临床合理用药杂志，2009（10）.
[2]王忠山，刘红，王会丽，李霞.阿莫西林/克拉维酸钾的少见不良反应[J].药物不良反应杂志，2004（4）.
[3]谢华，林洪丽，于长青.注射用阿莫西林钠致急性肾衰竭15例分析[J].大连医科大学学报，2005（5）.
[4]张彦会，张胜利，刘浩，白玉，代志，于佩华，李新波.国产注射用阿莫西林钠舒巴坦钠的急性毒性研究[J].河北医药，2004（1）.
[5]殷果，王铁杰，秦斌，邓颖，李军，郭兴杰.国产注射用阿莫西林钠中主要杂质分析[J].药物分析杂志，2011（10）.
[6]谢华，林洪丽，于长青.注射用阿莫西林钠致急性肾衰竭15例分析[J].大连医科大学学报，2005（5）.
关键词：阿莫西林胶囊；高分子杂质；含量
阿莫西林，又名安莫西林或安默西林，是一种最常用的半合成青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素。阿莫西林杀菌作用强，穿透细胞膜的能力也强。在临床上最常见的不良反应是速发型过敏反应。引发β-内酰胺抗生素速发型过敏反应的过敏原并不是β-内酰胺抗生素本身，而是其中存在的高分子聚合物。高分子聚合物具有强的抗原性质，在临床过敏反应中起重要作用。高分子杂质：高分子杂质是对药品中分子量大于药物本身的杂质总称。临床应用阿莫西林的不良反应发生率约为5-6%，其主要不良反应有：药物热、荨麻疹、皮疹、哮喘、过敏性休克、白细胞减少、血小板减少、腹泻、恶心、呕吐、滲出性多形性红斑、Lyell综合征、肝功能紊乱、肾功能紊乱、剥脱性皮炎、焦虑、失眠、头晕以及行为异常等中枢神经系统症状等[1-6]。凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。本文采用高校液相测定了阿莫西林胶囊中高分子杂质的含量。
1 仪器与试药
6000LDI高效液相色谱仪（天津琛航科苑科技发展有限公司）；UV1902双光束紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；赛多利斯Cubis？高端天平（德国赛多利斯集团）；OHAUS 奥豪斯 STARTER 3100 PH计（上海泉佰仪器有限公司）；ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；JULABO TW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京）有限公司）。
RE-52A实验室旋转蒸发器（上海比朗仪器有限公司）；SHB-（III）循环水式真空泵（上海楚柏实验室设备有限公司）；博翔兴旺80KHZ 高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）；实验室高纯水系统Aquelix 5（广州艾威仪器科技有限公司）。磷酸（济宁百川化工有限公司）、磷酸氢二钠（启东市名成化工有限公司）、冰醋酸（济宁百川化工有限公司）、乙腈（启东市名成化工有限公司）、甲醇（启东市名成化工有限公司）、磷酸二氢钠（济宁百川化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。固定相为：葡聚糖凝胶G-10（40-120um）为填充剂，玻璃柱内径1.0-1.4cm，柱长30-40cm；pH值为8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液[0.05mol/L磷酸氢二钠-0.05mol/L磷酸二氢钠（95：5）]为A流动相，水为B流动相；检测波长为254nm；流速1.5mL·min-1，柱温：30℃。理论板数按蓝色葡聚糖2000峰计算应不得低于500。拖尾因子应小于2.0.在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93-1.07之间，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值均应在0.93-1.07之间。取阿莫西林约0.2克至于10毫升容量瓶内，加加2%无水碳酸钠溶液4毫升超声溶解，用0.3mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取100μL注入色谱仪中，用A流动相检测，高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0。
2.2 测定方法
精密量取供试品溶液100μL注入色谱仪，以A流动相检测，记录色谱图。另精密量取对照品溶液100μL注入色谱仪，以B流动相检测。按外标法以青霉素峰面积计算，并乘以矫正因子0.2，计算阿莫西林胶囊聚合物的量。
2.3 蓝色葡聚糖2000溶液的制备
精密称取蓝色葡聚糖2000对照品约10mg，用水溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为蓝色葡聚糖200溶液。
2.4 0.3mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液的制备
精密称取蓝色葡聚糖2000对照品约10mg，用水溶解并稀释成每1ml中含0.3mg的溶液，作为0.3mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液。
2.5 供试品溶液的制备
取阿莫西林胶囊内容物，精密称取5克，至于20毫升容量瓶内，加2%无水碳酸钠溶液8毫升超声溶解，加水至刻度，摇匀，过滤，即得（临用前新配）。
2.6 对照品溶液的制备
精密称取青霉素对照品约10mg，用水溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.7 阴性溶液的制备
依照处方取阿莫西林胶囊辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在高分子杂质出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.8 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取对照品溶液100μL重复进样5次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.93%。结果表明，本实验精密度良好。
2.9 重现性试验
分别称取同批阿莫西林胶囊样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.91%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定阿莫西林胶囊三批样品中高分子杂质的含量，含量0.05%、0.06%、0.05%。
参考文献
[1]鄢清元，徐俐瑜，雷招宝.阿莫西林与阿莫西林/克拉维酸钾致不良反应差异分析[J].临床合理用药杂志，2009（10）.
[2]王忠山，刘红，王会丽，李霞.阿莫西林/克拉维酸钾的少见不良反应[J].药物不良反应杂志，2004（4）.
[3]谢华，林洪丽，于长青.注射用阿莫西林钠致急性肾衰竭15例分析[J].大连医科大学学报，2005（5）.
[4]张彦会，张胜利，刘浩，白玉，代志，于佩华，李新波.国产注射用阿莫西林钠舒巴坦钠的急性毒性研究[J].河北医药，2004（1）.
[5]殷果，王铁杰，秦斌，邓颖，李军，郭兴杰.国产注射用阿莫西林钠中主要杂质分析[J].药物分析杂志，2011（10）.
[6]谢华，林洪丽，于长青.注射用阿莫西林钠致急性肾衰竭15例分析[J].大连医科大学学报，2005（5）.