【摘 要】
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目的 探讨消化道皮肤素E(GSDME)蛋白过表达对结肠癌顺铂(DDP)敏感性的影响及其可能的分子机制.方法 包装过表达GSDME的慢病毒,筛选过表达GSDME的SW620和SW480稳转株后并检测
【机 构】
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天津医科大学基础医学院免疫学系,天津 300070;北京协和医学院基础医学院,北京 100005;天津医科大学肿瘤医院肺部肿瘤科,天津 300060
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目的 探讨消化道皮肤素E(GSDME)蛋白过表达对结肠癌顺铂(DDP)敏感性的影响及其可能的分子机制.方法 包装过表达GSDME的慢病毒,筛选过表达GSDME的SW620和SW480稳转株后并检测过表达效果;不同浓度的DDP处理结肠癌细胞24 h后,通过MTT法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC50)值,显微镜观察细胞死亡形态,相关试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和白细胞介素-1β(IL-1β)的释放水平,蛋白质印迹法检测裂解形式的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cl-Caspase-3)和GSDME-N端蛋白.随机数字表法将24只裸鼠平均分为4组,即2对照组(GSDME+Vehicle和WT-SW620+Vehicle)和2实验组(GSDME+DDP和WT-SW620+DDP),建立裸鼠皮下结肠癌模型,测量各组瘤体质量和体积,并比较用药处理前后各组动物体质量的变化.采用SPSS 22.0对数据进行统计学分析.结果 结肠癌中筛选出成功过表达GSDME的SW620和SW480稳转株;MTT实验求得2细胞株对DDP处理24 h的IC50值分别为4.91和10.78μg/mL.在小鼠结肠癌模型中:与对照组相比,DDP处理后瘤体积(F=26.67)和瘤体质量(F=38.82)均减小,差异均有统计学意义,均P0.05.体外培养经DDP处理后,SW620对照组中Vector活力为56.89％,而实验组GSDME活力为30.24％(t=11.29),SW480细胞组中Vector活力为66.23％而过表达组活力为28.67％(t=6.89),差异均有统计学意义(均P<0.001),且细胞死亡形态呈现细胞肿胀、细胞膜破裂等.与对照组相比,SW620和SW4802细胞株中过表达组的LDH和IL-1β释放量增加且可以被半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3抑制剂(z-VAD)所抑制,差异均有统计学意义,均P<0.001;蛋白质印迹法显示,过表达GSDME后,DDP上调cl-Caspase-3和GSDME-N端蛋白表达且可以被z-VAD所抑制,差异均有统计学意义,均P<0.01.结论 过表达GSDME影响结肠癌细胞对DDP的敏感性,这个过程可能是通过Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡实现的.
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