探讨肝素预处理对脓毒症小鼠血清及肺组织中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的影响及其作用机制。
方法按随机数字表法将雄性C57BL/6J小鼠分为对照组、模型组、肝素干预组,每组30只。腹腔注射脂多糖(LPS) 30 mg/kg(溶于100 μL生理盐水)建立脓毒症动物模型;肝素干预组于制模前30 min皮下注射普通肝素8 U(溶于20 μL生理盐水)。各组于制模后6 h取血清和肺组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及反映NETs水平的组蛋白2AX(H2AX)和中性粒细胞弹性蛋白酶(NE);用PicoGreen荧光染料检测血清游离DNA(cf-DNA/NETs)水平;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织H2AX、NE蛋白表达。
结果模型组血清TNF-α、IL-6、H2AX、NE、cf-DNA/NETs水平及肺组织H2AX、NE蛋白表达均明显高于对照组〔TNF-α(ng/L):133.0±14.1比2.7±1.0,IL-6(ng/L):3 911.2±189.2比298.9±52.5,H2AX(ng/L):545.5±40.0比21.9±8.3,NE(μg/L):6.48±0.12比0.47±0.15,cf-DNA/NETs(μg/L):846.3±137.5比152.7±36.4,H2AX蛋白(灰度值):1.14±0.09比0.68±0.04,NE蛋白(灰度值):0.56±0.03比0.32±0.04,均P<0.05〕。肝素预处理能明显降低脓毒症小鼠血清TNF-α、H2AX、NE、cf-DNA/NETs水平及肺组织H2AX、NE蛋白表达〔TNF-α(ng/L):83.2±7.6比133.0±14.1,H2AX(ng/L):435.0±39.0比545.5±40.0,NE(μg/L):4.26±0.17比6.48±0.12,cf-DNA/NETs(μg/L):606.5±73.9比846.3±137.5,H2AX蛋白(灰度值):0.91±0.03比1.14±0.09,NE蛋白(灰度值):0.42±0.03比0.56±0.03,均P<0.05〕,而对血清IL-6水平无明显影响(ng/L:3 919.9±166.6比3 911.2±189.2,P>0.05)。
结论肝素预处理能降低脓毒症小鼠血清及肺组织中NETs水平,可能是对脓毒症发挥器官保护作用的潜在机制。