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用PCR技术从Bacillus Calmette-guérin(BCG)基因组中扩增出抗原85B(Ag85B)的信号肽(SP)DNA序列,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因.利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG-2100的人结核杆菌HSP70启动子下游,构建成分泌型原核穿梭表达质粒(pBCG-SP-HSP65).酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65构建成功.利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobac