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Ｇ１、Ｇ２引物是对问号钩体具有特异性引物。分别用Ｇ１或Ｇ２单引物对问号钩体中国参考株进行前４个低严格度循环的ＰＣＲ扩增，扩增带谱显示赖型、犬型、致热型、秋季型、澳洲型、临海型、乌尔夫型、溶血型为一类，而爪哇型、拜伦型、波摩那型、七日热型、巴叶赞型塔拉索夫型、曼耗Ⅱ型是不与以上赖型等血清型本为一类，双曲钩体ａｔｏｃ型及伊利尼细丝体伊利尼型的扩增带谱与问号钩体截然不同。应用苯酚法提取的高纯度钩体ＤＮＡ