【摘 要】
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目的 从噬菌体展示的随机十二肽库中筛选N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)2B亚基模拟抗原表位.方法 以NMDAR2B单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M
【机 构】
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武汉市,中山大学附属第一医院麻醉科
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目的 从噬菌体展示的随机十二肽库中筛选N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)2B亚基模拟抗原表位.方法 以NMDAR2B单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机十二肽.经过3轮筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选12个单克隆噬菌体扩增后进行ELISA鉴定,用酶标仪测定450 nm处的吸光值(A450).对这12个单克隆噬菌体分别进行扩增、纯化,并对DNA测序,以确定插入十二肽的氨基酸序列.通过细胞竞争ELISA法分析阳性单克隆噬菌体对NMDAR2B天然抗原表位与其特异性抗体结合的竞争性抑制.结果 经过3轮筛选后能与NMDAR2B单克隆抗体特异性结合的噬菌体得到了有效富积,12个单克隆噬菌体中有9个单克隆噬菌体的A450高于其它3个.DNA测序结果表明这9个单克隆噬菌体表达了一个共同氨基酸序列:SHPPVMPWPTST,将其命名为阳性克隆噬菌体,该阳性克隆噬菌体可以竞争性抑制细胞表面天然抗原与特异性抗体的结合,抑制率(45±3)%,具有抗原模拟性.结论 从噬菌体展示的随机十二肽库中成功筛选到了能与NMDAR2B特异性抗体结合的短肽,该肽模拟了天然抗原的某个表位.
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