【摘 要】
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目的:探讨莪术二酮对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和细胞周期的作用.方法:体外培养MDA-MB-231细胞,以卡培他滨作为阳性对照,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度的莪术二酮(125,250,500,1000,2000μmol· L-1)作用细胞24,48 h后对细胞活力的影响;选取3个有效抑制增殖的莪术二酮浓度(250,500,1000 μmol·L-1)进行后续实验.流式细胞术结合碘化丙啶(PI)染色法检测莪术二酮对细胞周期的影响;增设高浓度组(2000 μmol·L
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海200025
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目的:探讨莪术二酮对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和细胞周期的作用.方法:体外培养MDA-MB-231细胞,以卡培他滨作为阳性对照,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度的莪术二酮(125,250,500,1000,2000μmol· L-1)作用细胞24,48 h后对细胞活力的影响;选取3个有效抑制增殖的莪术二酮浓度(250,500,1000 μmol·L-1)进行后续实验.流式细胞术结合碘化丙啶(PI)染色法检测莪术二酮对细胞周期的影响;增设高浓度组(2000 μmol·L-1),用JC-1法检测莪术二酮对细胞线粒体膜电位的影响,并采用流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测莪术二酮作用后细胞中周期调控和凋亡相关蛋白表达的变化.结果:与空白组比较,250,500,1000,2000 μmol·L-1莪术二酮对细胞增殖有显著抑制作用(P＜0.01),效果呈浓度和时间依赖性,24 h和48 h的半抑制浓度(IC50)分别为1607,1401μmol·L-1;250,500,1000 μmol·L-1莪术二酮可将细胞阻滞在G1期;250 μmo1·L-1莪术二酮对细胞线粒体膜电位无影响,500,1000,2000 μmo1·L-1莪术二酮可使细胞线粒体膜电位明显下降(P＜0.05,P＜0.01);250,500,1000 μmol·L-1莪术二酮可使凋亡细胞比例明显增加(P＜0.05,P＜0.01);各浓度莪术二酮可使B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)/B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)明显增加(P＜0.05,P＜0.01),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达量无明显变化,而Caspase-9,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3,p53和p21蛋白表达量均有所增加(P＜0.05).结论:一定浓度的莪术二酮能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,可能与其阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关.
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