【摘 要】
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目的:应用RNA干扰技术,构建针对Skp2的siRNA表达载体,抑制喉鳞状细胞癌细胞Skp2基因的表达。方法:根据设计siRNA的原则,针对人Skp2的mRNA序列,设计并合成编码siRNA的2条寡核
【机 构】
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白求恩国际和平医院耳鼻咽喉-头颈外科全军耳鼻咽喉病中心,
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目的:应用RNA干扰技术,构建针对Skp2的siRNA表达载体,抑制喉鳞状细胞癌细胞Skp2基因的表达。方法:根据设计siRNA的原则,针对人Skp2的mRNA序列,设计并合成编码siRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆到真核表达载体pGPU6/Neo中构建重组体pGPU6Skp2,转化DH5α菌株,提取质粒进行酶切鉴定后,进行序列测定。然后转染重组质粒至Hep2细胞中,应用流式细胞术检测Skp2基因的表达。结果:将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,经酶切和测序鉴定确实为所需序列。pGPU6Skp2转染细胞后,Skp2基因在蛋白水平的表达量受到明显抑制。结论:成功构建了针对人Skp2的siRNA表达载体,通过转染Hep2细胞,可有效抑制细胞Skp2的表达,为后续基因治疗研究奠定了实验基础。
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