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摘要：目的 探讨乳腺癌组织中E-cadherin 和 p53的阳性表达与浸润转移的关系 方法 选取2012年9月2013年9月永州市中心医院乳腺癌标本80例，采用免疫组化法检测E-cadherin 和 p53 蛋白的阳性表达情况。结果①E-cadherin、p53在 80 例乳腺癌组织中阳性表达率分别为70%（56/80）、66.2%（53/80）。②E-cadherin阳性表达随组织学分级升高而降低（p<0.05），且有淋巴结转移组E-cadherin的阳性表达率较无淋巴结转移组低（p<0.05）。③p53阳性表达与组织学分级有关，且有淋巴结转移组p53的阳性表达率较无淋巴结转移组高（p<0.05）。结论 乳腺癌组织中E-cadherin 和 p53 的表达可作为乳腺癌浸润转移潜能的判断指标之一，具有重要的临床意义"
关键词：乳腺癌；E-cadherin；p53；浸润转移
乳腺癌目前居女性常见恶性肿瘤的首位[1-2]，严重危害女性的健康。乳腺癌导致人死亡的关键在于癌细胞发生了转移同时还侵袭身体的其它器官 [3--4]，而淋巴转移是乳腺癌的重要转移途径。其淋巴结转移与否及组织学分级常被临床作为选择治疗方法和判断治疗预后的重要参考指标。E-cadherin基因作为判断乳腺癌转移的重要标志物之一，具有重要临床意义，p53 作为评估乳腺癌变预后的另一指标，其在乳腺癌的发生、发展中也具有重要作用，且乳腺癌的淋巴结浸润转移的关系密切。本研究采用免疫组化sp法检测 80 例乳腺癌组织中E-cadherin 和 p53蛋白的阳性表达情况，旨在探讨乳腺癌组织中E-cadherin 和 p53的阳性表达与组织学分级、浸润转移的相关性分析。
1材料与方法
1.1临床病理资料
选取2012年9月至2013年9月永州市中心医院乳腺癌标本，均经两名病理医师阅片确诊且均选取为非特殊性浸润性导管癌80例。年龄在32-78岁之间，平均年龄在45.3岁。根据WHO乳腺肿瘤病理学和遗传学分类（2003）推荐的半定量组织学分级标准进行组织学分级，Ⅰ级20例，Ⅱ级32例，Ⅲ级28例。淋巴结转移32例，无淋巴结转移48例。
1.2主要试剂 E-cadherin单克隆抗体、p53单克隆抗体，sp试剂盒和DAB试剂盒均购于福州迈新生物技术有限公司。
1.3实验方法
本实验采用免疫组化sp法检测。所有的标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4um厚切片，
常规石蜡切片HE染色，免疫组化采用S-P法。实验步骤按说明书进行，柠檬酸缓冲液高温高压修复，DAB显色，苏木精复染。以E-Cadherin和p53阳性切片做阳性对照，以PBS液代替一抗做阴性对照。
1.4结果判定
E-Cadherin染色阳性信号位于在细胞膜或者细胞质，呈棕黄色颗粒。采用双评分方法评定结果，按阳性细胞百分比例：无阳性细胞或者阳性细胞小于10%为0分，阳性细胞10%-30%为1分，阳性细胞31-60%为2分，大于61%为3分，细胞不着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，两项评分乘积小于6分为阴性表达，大于或等于6分为阳性表达。P53染色阳性信号位于细胞核，呈棕黄色颗粒，
1.5 统计分析
应用SPSS17.0软件进行X2检验，若P<0.05差异有显著性。
2结果
2.1 E-cadherin 和p53在乳腺癌中阳性表达 E-cadherin 和p53在80 例乳腺癌组织中阳性表达率分别为70%（56/80）、66.2%（53/80）如表1所示。
2.2 E-cadherin 和p53在不同组织学分级阳性表达 E-cadherin阳性表达率在不同的组织学分级为I级95%（19/20）、Ⅱ级78.1%（22/32）、Ⅲ级42.8%（12/28）；p53阳性表达率在不同的组织学分级为I级55.0%（11/20）、Ⅱ级68.8%（22/32）、Ⅲ级71.4%（20/28）。如表2所示
2.3 E-cadherin 和p53在淋巴结有无转移的阳性表达 E-cadherin阳性表达率在有淋巴结转移组中为46.8%（15/32），无淋巴结转移组中为85.4%（41/48）；p53阳性表达率在有淋巴结转移组中为81.2%（26/32），无淋巴结转移组中为56.2%（27/48）。如表3所示
3讨论
E-cadherin基因位于人类第16号染色体第16q22.1位点，一种单次跨膜糖蛋白，属于细胞粘附分子蛋白质家族，广泛表于各种组织中，它在维持上皮细胞之间粘附连接，保持组织结构的完整性起着重要的作用。E-cadherin是调节细胞与细胞间，细胞与基质间粘附反应的重要媒介，可以通过促进同型细胞间粘附，可以使癌细胞保持紧密连接，难以脱离原发灶进入脉管和淋巴结，故被认为是一个重要的肿瘤转移抑制基因[5]。赵卫[6]等曾报道E-cadherin 蛋白表达水平随着肿瘤脉管浸润和淋巴结转移的发生，E-cadherin 蛋白的表达明显降低，随着乳腺癌的病理学分级逐渐升高，E-cadherin 蛋白的表达水平也逐渐降低。本研究中表明，淋巴结转移的发生，E-cadherin 蛋白的表达明显降低，随着乳腺癌的病理学分级逐渐升高，E-cadherin蛋白的表达水平也逐渐降低，与赵卫的报道较一致。这可能说明，E-cadherin过度表达时细胞粘附力增强，不易发生转移和浸润，而表达水平降低时导致细胞间的粘附作用力降低，癌细胞容易脱落，从而发生浸润和转移。
p53位于人17号染色体短臂上，分野生型和突变型。野生型作为一种抑癌基因，能抑制多种癌基因的转化活性，而突变型p53可导致所编码的蛋白功能丧失，可促进细胞的恶性转化和增殖。野生型的p53半衰期短，免疫组化不易检测到，突变型p53稳定性明显增强，在细胞内聚集比正常细胞多很多倍，免疫组化易检测到，且突变型p53见于多种恶性肿瘤中。林黎娟等[7]报道腋窝淋巴结转移组p53阳性表达率57%；未转移组，p53阳性表达率31%，转移组p53阳性表达较未转移组明显增高。任秋华[8]报道p53蛋白表达与分级、转移呈正相关，随着组织学分级增高而阳性表达增高。本文研究表明p53蛋白表达在组织学分级I级与Ⅱ级、Ⅲ级表达有显著差异，而在Ⅱ级和Ⅲ级之间表达没有差异，与任秋华报道有不同，可能是由于标本数量有限没有体现出之间的差异性。本研究中p53蛋白表达在淋巴结转移中阳性表达率81.2%，无淋巴结转移中阳性表达率为56.2%，与林黎娟报道较一致，淋巴结转移组中p53阳性表达率明显高于无淋巴结转移组。众多研究表明，P53蛋白的表达水平与乳腺癌的淋巴结转移以及预后等有明显关系，它可作为乳腺癌预后的一项重要参数。 恶性肿瘤的分化程度、侵袭力、转移性是极其复杂的问题，不是某一两个因素所左右的，恶性肿瘤的预后及高危因素与肿瘤的组织学分级及是否有淋巴结转移息息相关。本研究表明E-cadherin 和p53阳性表达率在淋巴结转移中表达是呈负相关的，而在组织学分级中E-cadherin阴性表达率 和p53阳性表达率呈正相关。因此E-cadherin 和p53的联合检测可作为筛选乳腺癌高危患者的手段之一。
参考文献：
[1]姜达.乳腺癌内分泌治疗研究进展[J].肿瘤基础与临床，2012，25（1）：84-88.
[2]Siegel R，Ward E，Brawley O，et al.Cancer statistics，2011：the impact of eliminating socioeconomic and racial disparities on premature cancer deaths[J].CA Cancer J Clin，2011，61（4）：212-236.
[3]Giuliano AE，Hawes D，Ballman KV，et al.Association of occult metastases in sentinel lymph nodes and bone marrow with survival among women with early-stage invasive breast cancer[J].JAMA，2011，306（4）：385-393.
[4]Cheng X，Hung MC.Breast cancer brain metastases [J].Cancer Metastas is Rev，2007，26（3-4）：635-643.
[5]Nijkamp MM，Span PN，Hoogsteen IJ，et al.Expression of E-cadherin and vimentin correlates with metastasis formation in head and neck squamous cell carcinoma patients[J].Radiother Oncol，2011，99（3）：344-348.
[6]赵卫，陈芙蓉，任宏政等.E-cadherin蛋白在乳腺导管癌中的表达及意义[J].临床医学，2012，32（1）：28-30.
[7]林黎娟，林贞花，张锦辉等.乳腺浸润性导管癌p53表达与腋窝淋巴结转移的相关性分析[J].辽宁学院学报，2010，17（1）：31-33.
[8]任秋华，肖明明，侯慧等.ER、PR、C-erbB2、P53和ki-67蛋白在乳腺癌中的表达及其意义[J]中国肿瘤临床与康复.2010，17（1）13-15.
关键词：乳腺癌；E-cadherin；p53；浸润转移
乳腺癌目前居女性常见恶性肿瘤的首位[1-2]，严重危害女性的健康。乳腺癌导致人死亡的关键在于癌细胞发生了转移同时还侵袭身体的其它器官 [3--4]，而淋巴转移是乳腺癌的重要转移途径。其淋巴结转移与否及组织学分级常被临床作为选择治疗方法和判断治疗预后的重要参考指标。E-cadherin基因作为判断乳腺癌转移的重要标志物之一，具有重要临床意义，p53 作为评估乳腺癌变预后的另一指标，其在乳腺癌的发生、发展中也具有重要作用，且乳腺癌的淋巴结浸润转移的关系密切。本研究采用免疫组化sp法检测 80 例乳腺癌组织中E-cadherin 和 p53蛋白的阳性表达情况，旨在探讨乳腺癌组织中E-cadherin 和 p53的阳性表达与组织学分级、浸润转移的相关性分析。
1材料与方法
1.1临床病理资料
选取2012年9月至2013年9月永州市中心医院乳腺癌标本，均经两名病理医师阅片确诊且均选取为非特殊性浸润性导管癌80例。年龄在32-78岁之间，平均年龄在45.3岁。根据WHO乳腺肿瘤病理学和遗传学分类（2003）推荐的半定量组织学分级标准进行组织学分级，Ⅰ级20例，Ⅱ级32例，Ⅲ级28例。淋巴结转移32例，无淋巴结转移48例。
1.2主要试剂 E-cadherin单克隆抗体、p53单克隆抗体，sp试剂盒和DAB试剂盒均购于福州迈新生物技术有限公司。
1.3实验方法
本实验采用免疫组化sp法检测。所有的标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4um厚切片，
常规石蜡切片HE染色，免疫组化采用S-P法。实验步骤按说明书进行，柠檬酸缓冲液高温高压修复，DAB显色，苏木精复染。以E-Cadherin和p53阳性切片做阳性对照，以PBS液代替一抗做阴性对照。
1.4结果判定
E-Cadherin染色阳性信号位于在细胞膜或者细胞质，呈棕黄色颗粒。采用双评分方法评定结果，按阳性细胞百分比例：无阳性细胞或者阳性细胞小于10%为0分，阳性细胞10%-30%为1分，阳性细胞31-60%为2分，大于61%为3分，细胞不着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，两项评分乘积小于6分为阴性表达，大于或等于6分为阳性表达。P53染色阳性信号位于细胞核，呈棕黄色颗粒，
1.5 统计分析
应用SPSS17.0软件进行X2检验，若P<0.05差异有显著性。
2结果
2.1 E-cadherin 和p53在乳腺癌中阳性表达 E-cadherin 和p53在80 例乳腺癌组织中阳性表达率分别为70%（56/80）、66.2%（53/80）如表1所示。
2.2 E-cadherin 和p53在不同组织学分级阳性表达 E-cadherin阳性表达率在不同的组织学分级为I级95%（19/20）、Ⅱ级78.1%（22/32）、Ⅲ级42.8%（12/28）；p53阳性表达率在不同的组织学分级为I级55.0%（11/20）、Ⅱ级68.8%（22/32）、Ⅲ级71.4%（20/28）。如表2所示
2.3 E-cadherin 和p53在淋巴结有无转移的阳性表达 E-cadherin阳性表达率在有淋巴结转移组中为46.8%（15/32），无淋巴结转移组中为85.4%（41/48）；p53阳性表达率在有淋巴结转移组中为81.2%（26/32），无淋巴结转移组中为56.2%（27/48）。如表3所示
3讨论
E-cadherin基因位于人类第16号染色体第16q22.1位点，一种单次跨膜糖蛋白，属于细胞粘附分子蛋白质家族，广泛表于各种组织中，它在维持上皮细胞之间粘附连接，保持组织结构的完整性起着重要的作用。E-cadherin是调节细胞与细胞间，细胞与基质间粘附反应的重要媒介，可以通过促进同型细胞间粘附，可以使癌细胞保持紧密连接，难以脱离原发灶进入脉管和淋巴结，故被认为是一个重要的肿瘤转移抑制基因[5]。赵卫[6]等曾报道E-cadherin 蛋白表达水平随着肿瘤脉管浸润和淋巴结转移的发生，E-cadherin 蛋白的表达明显降低，随着乳腺癌的病理学分级逐渐升高，E-cadherin 蛋白的表达水平也逐渐降低。本研究中表明，淋巴结转移的发生，E-cadherin 蛋白的表达明显降低，随着乳腺癌的病理学分级逐渐升高，E-cadherin蛋白的表达水平也逐渐降低，与赵卫的报道较一致。这可能说明，E-cadherin过度表达时细胞粘附力增强，不易发生转移和浸润，而表达水平降低时导致细胞间的粘附作用力降低，癌细胞容易脱落，从而发生浸润和转移。
p53位于人17号染色体短臂上，分野生型和突变型。野生型作为一种抑癌基因，能抑制多种癌基因的转化活性，而突变型p53可导致所编码的蛋白功能丧失，可促进细胞的恶性转化和增殖。野生型的p53半衰期短，免疫组化不易检测到，突变型p53稳定性明显增强，在细胞内聚集比正常细胞多很多倍，免疫组化易检测到，且突变型p53见于多种恶性肿瘤中。林黎娟等[7]报道腋窝淋巴结转移组p53阳性表达率57%；未转移组，p53阳性表达率31%，转移组p53阳性表达较未转移组明显增高。任秋华[8]报道p53蛋白表达与分级、转移呈正相关，随着组织学分级增高而阳性表达增高。本文研究表明p53蛋白表达在组织学分级I级与Ⅱ级、Ⅲ级表达有显著差异，而在Ⅱ级和Ⅲ级之间表达没有差异，与任秋华报道有不同，可能是由于标本数量有限没有体现出之间的差异性。本研究中p53蛋白表达在淋巴结转移中阳性表达率81.2%，无淋巴结转移中阳性表达率为56.2%，与林黎娟报道较一致，淋巴结转移组中p53阳性表达率明显高于无淋巴结转移组。众多研究表明，P53蛋白的表达水平与乳腺癌的淋巴结转移以及预后等有明显关系，它可作为乳腺癌预后的一项重要参数。 恶性肿瘤的分化程度、侵袭力、转移性是极其复杂的问题，不是某一两个因素所左右的，恶性肿瘤的预后及高危因素与肿瘤的组织学分级及是否有淋巴结转移息息相关。本研究表明E-cadherin 和p53阳性表达率在淋巴结转移中表达是呈负相关的，而在组织学分级中E-cadherin阴性表达率 和p53阳性表达率呈正相关。因此E-cadherin 和p53的联合检测可作为筛选乳腺癌高危患者的手段之一。
参考文献：
[1]姜达.乳腺癌内分泌治疗研究进展[J].肿瘤基础与临床，2012，25（1）：84-88.
[2]Siegel R，Ward E，Brawley O，et al.Cancer statistics，2011：the impact of eliminating socioeconomic and racial disparities on premature cancer deaths[J].CA Cancer J Clin，2011，61（4）：212-236.
[3]Giuliano AE，Hawes D，Ballman KV，et al.Association of occult metastases in sentinel lymph nodes and bone marrow with survival among women with early-stage invasive breast cancer[J].JAMA，2011，306（4）：385-393.
[4]Cheng X，Hung MC.Breast cancer brain metastases [J].Cancer Metastas is Rev，2007，26（3-4）：635-643.
[5]Nijkamp MM，Span PN，Hoogsteen IJ，et al.Expression of E-cadherin and vimentin correlates with metastasis formation in head and neck squamous cell carcinoma patients[J].Radiother Oncol，2011，99（3）：344-348.
[6]赵卫，陈芙蓉，任宏政等.E-cadherin蛋白在乳腺导管癌中的表达及意义[J].临床医学，2012，32（1）：28-30.
[7]林黎娟，林贞花，张锦辉等.乳腺浸润性导管癌p53表达与腋窝淋巴结转移的相关性分析[J].辽宁学院学报，2010，17（1）：31-33.
[8]任秋华，肖明明，侯慧等.ER、PR、C-erbB2、P53和ki-67蛋白在乳腺癌中的表达及其意义[J]中国肿瘤临床与康复.2010，17（1）13-15.