【摘 要】
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目的探讨生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g(Gadd45g)过表达及靶向沉默对垂体瘤AtT-20细胞及小鼠原代星型胶质细胞的增殖、凋亡及自噬等影响。方法构建Gadd45g基因的CDS区序列克
【机 构】
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江苏大学附属人民医院神经外科,江苏大学医学院,
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目的探讨生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g(Gadd45g)过表达及靶向沉默对垂体瘤AtT-20细胞及小鼠原代星型胶质细胞的增殖、凋亡及自噬等影响。方法构建Gadd45g基因的CDS区序列克隆至真核表达质粒p3XFLAG-Gadd45g及其shRNA真核表达质粒pLKO.1-sh-Gadd45g,将p3XFLAG-Gadd45g转染至小鼠垂体瘤AtT-20细胞中。其shRNA真核表达质粒pLKO.1-purosh-Gadd45g进行慢病毒包装,病毒感染小鼠星形胶质细胞;Western blot检测FLAG-Gadd45g融合蛋白的表达及RT-PCR检测shRNA沉默效率,CCK-8检测细胞增殖活力,Western blot检测其对凋亡蛋白、自噬蛋白的影响。结果 Gadd45g及其特异性shRNA真核表达质粒构建成功。构建的p3XFLAGGadd45g质粒在垂体瘤AtT-20细胞中能够表达;Gadd45g shRNA具有沉默效率。在垂体瘤AtT-20细胞中过表达Gadd45g,可明显抑制细胞增殖,并能诱导Caspase-3表达,降低Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05)。与之相反,在原代培养的星形胶质细胞中,shRNA干扰Gadd45g表达,可促进细胞增殖,并降低Caspase-3表达,而增加Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05)。结论垂体瘤中Gadd45g的表达缺失可能使得垂体瘤AtT-20细胞凋亡受阻及自噬作用增强,从而促进垂体瘤的发生、发展。恢复垂体瘤细胞中Gadd45g的表达及抑制垂体瘤细胞自噬作用有望成为垂体瘤治疗的新方法。
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