观察九龙藤总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。
方法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,培养72 h后随机分为空白对照组,模型组,九龙藤总黄酮高、中、低剂量组,舒血宁注射液组。除空白对照组外,其余各组细胞经H2O2(100 μg/ml)处理。九龙藤总黄酮高、中、低剂量组给予含240、120、60 μg/ml九龙藤总黄酮的培养液干预,舒血宁注射液组给予含100 μg/ml舒血宁注射液的培养液,空白对照组和模型组给予普通培养基培养。干预6 h后,通过倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率;检测各组细胞培养液中天冬氨酸转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;测定各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;通过流式细胞术测定细胞凋亡率,并通过Western blot方法检测心肌细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达。
结果与模型组比较,九龙藤总黄酮中、高剂量组心肌细胞培养液中AST[(28.8±6.1)U/ml、(24.5±5.3)U/ml比(36.2±6.7)U/ml]、CPK[(1.8±0.4)U/ml、(1.5±0.3)U/ml比(2.5±0.4)U/ml]、LDH[(805.2±160.9)U/L、(671.5±128.7)U/L比(916.5±168.4)U/L]水平降低(P<0.05或P<0.01);心肌细胞中SOD[(84.8±17.4)U/mg、(95.3±18.2)U/mg比(55.7±13.1)U/mg]、CAT[(23.4±3.1)U/mg、(26.3±3.5)U/mg比(15.2±3.0)U/mg]水平升高(P<0.05或P<0.01),MDA[(8.1±1.7)nmol/mg、(6.8±1.5)nmol/mg比(11.1±2.3)nmol/mg]水平降低(P<0.05或P<0.01),caspase-3[(1.64±0.16)、(1.30±0.12)比(2.06±0.25)]表达、细胞凋亡率[(24.2±5.5)%、(13.4±3.9)%比(51.2±9.1)%]显著降低(P<0.05或P<0.01);九龙藤总黄酮高剂量组细胞中GSH-Px[(3.6±0.9)U/mg比(2.4±0.7)U/mg]活性显著升高(P<0.05)。
结论九龙藤总黄酮可有效改善H2O2诱导氧化应激损伤乳鼠心肌细胞形态、提高细胞存活率、改善抗氧化酶活性、下调caspase-3表达、降低细胞凋亡率,对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤具有剂量依赖性的保护作用。