【摘 要】
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[目的]构建pCDNA3.1-Annexin A7载体并稳定转染Hca-P细胞.[方法]提取小鼠总RNA,逆转录成cD-NA,PCR扩增,获取Annexin A7 CDS,将PcDNA3.1(+)质粒和Annexin A7 CDS片段行BamH I
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[目的]构建pCDNA3.1-Annexin A7载体并稳定转染Hca-P细胞.[方法]提取小鼠总RNA,逆转录成cD-NA,PCR扩增,获取Annexin A7 CDS,将PcDNA3.1(+)质粒和Annexin A7 CDS片段行BamH I和EcoR I双酶切,构建并抽提pCDNA3.1-Annexin A7质粒,测序鉴定后转染Hca-P细胞,经400 μg/mL G418完全培养基筛选获得pCDNA3.1-Armexin A7载体稳定转染的Hca-P细胞,在蛋白质水平检验Annexin A7的表达并行基因组DNA鉴定.[结果]成功构建pCDNA3.1-Annexin A7载体,经测序鉴定,所得到的载体中的CDS经比对与库中序列一致.pCDNA3.1-Annexin A7载体转染Hca-P细胞后,获得稳定上调表达Annexin A7的Hca-P细胞株;行基因组DNA鉴定,证实pCDNA3.1-Annexin A7已转入Hca-P细胞中,western-blotting结果显示转染前后蛋白的表达相对值Annexin A7/GAPDH分别为0.43544±0.0112和0.45957±0.0065(P＜0.05).[结论]pCDNA3.1-Annexin A7的构建并稳定转染Hca-P细胞成功,为通过上调Annexin A7在Hca-P的表达以证实Annexin A7与恶性肿瘤淋巴道转移潜能关系的相关研究打下了基础.
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