【摘 要】
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目的 研究靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸(PNA)对树突状细胞(DC)CCR7蛋白表达及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制.方法 体外培养大鼠骨髓来源的DC,脂多糖(LPS)诱导成熟.设计靶
【机 构】
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山西医科大学第二医院普外科,山西医科大学第一医院普外科,武汉
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目的 研究靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸(PNA)对树突状细胞(DC)CCR7蛋白表达及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制.方法 体外培养大鼠骨髓来源的DC,脂多糖(LPS)诱导成熟.设计靶向CCR7 mRNA翻译起始区的反义PNA,以随机PNA和空白组为对照处理体外培养7 d的未成熟DC,脂多糖诱导48 h后收集成熟DC,免疫细胞化学染色法检测CCR7蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测磷酸化Akt和Akt蛋白表达.应用渥曼青霉素(wortmannin)抑制磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt信号通路进一步观察磷酸化Akt蛋白表达和细胞凋亡率的变化.结果 反义PNA组DC CCR7蛋白表达明显低于随机PNA组和空白组,而细胞凋亡率却明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05),Western blot检测显示反义PNA组Akt蛋白磷酸化水平明显低于随机PNA组和空白组,差异有统计学意义(P＜0.05).DC经PI3K抑制剂预处理后,CCR7介导的Akt蛋白磷酸化及抗凋亡作用被阻断.结论 CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠DC趋化因子受体CCR7的表达并导致其发生凋亡,其机制可能是阻断了CCR7介导PI3K/Akt信号转导通路的活化.
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