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目的:通过测定不同产地制何首鸟中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、五没食子酰葡萄糖、没食子酸5种指标性成分的含量,建立制何首乌HPLC指纹图谱分析方法.方法:采用高效液相色谱法,Agilent EclipseXDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,波长254 nm,柱温30℃,对13批制何首乌药材的HPLC指纹图谱进行分析.结果:通过使用中药指纹图谱相似度评价软件分析,确定了29个共有峰,指认了五没食子酰葡萄糖、没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚5个化学成分.结论:本实验所建立的方法可为不同产地不同批次制何首乌药材质量评价提供参考.