【摘 要】
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目的 探讨左金丸对胃癌细胞自噬及耐药性的影响,并分析可能机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SNU-1、SNU-1/5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞,采用四甲基偶氮唑盐法检测SNU-1、SNU-1/5-FU细胞存活率,并计算药物半数抑制浓度(IC50);将5-FU处理的细胞分为SNU-1组、SNU-1/5-FU组、左金丸组和左金丸联合自噬激活剂组.采用流式AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率;透射电镜下观察各组细胞自噬体并计算自噬体中自噬泡占细胞浆总面积百分比;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白[B淋
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院检验科 201203
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目的 探讨左金丸对胃癌细胞自噬及耐药性的影响,并分析可能机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SNU-1、SNU-1/5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞,采用四甲基偶氮唑盐法检测SNU-1、SNU-1/5-FU细胞存活率,并计算药物半数抑制浓度(IC50);将5-FU处理的细胞分为SNU-1组、SNU-1/5-FU组、左金丸组和左金丸联合自噬激活剂组.采用流式AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率;透射电镜下观察各组细胞自噬体并计算自噬体中自噬泡占细胞浆总面积百分比;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白微管相关蛋白[1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、LC3-Ⅱ、家蚕隔离体蛋白1(p62)]及AMP激活蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)通路相关蛋白水平.结果 SNU-1、SNU-1/5-FU细胞IC50分别为19.05、45.07μg/mL,耐药指数为2.36;与SNU-1组比较,SNU-1/5-FU组细胞凋亡率、Bcl-2、p62、p-mTOR/mTOR蛋白表达均明显降低,Bax、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、p-AMPK/AMPK表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与SNU-1/5-FU组比较,左金丸组、左金丸联合自噬激活剂组细胞凋亡率、Bcl-2、p62、p-mTOR/mTOR蛋白水平均明显升高,自噬体数量、自噬泡/细胞质总面积、Bax、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、p-AMPK/AMPK表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与左金丸组比较,左金丸联合自噬激活剂组细胞凋亡率、Bcl-2、p62、p-mTOR/mTOR水平均明显降低,自噬体数量、自噬泡/细胞质总面积、Bax、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、p-AMPK/AMPK表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 左金丸可抑制SNU-1/5-FU细胞增殖并诱导凋亡,减弱SNU-1/5-FU细胞对5-FU的耐药性,可能是通过抑制AMPK/mTOR通路活化进而抑制细胞自噬实现的.
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