【摘 要】
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目的 观察转录因子叉头框蛋白Q1(FOXQl)基因沉默对膀胱癌T24细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其促进肿瘤侵袭转移的作用机制.方法 构建针对FOXQ1基因的短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,脂质体Lipofactamine 2000介导FOXQ1干扰质粒转染人膀胱癌细胞株T24细胞；转染48 h后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测FOXQ1、上
【机 构】
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430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,430022武
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目的 观察转录因子叉头框蛋白Q1(FOXQl)基因沉默对膀胱癌T24细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其促进肿瘤侵袭转移的作用机制.方法 构建针对FOXQ1基因的短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,脂质体Lipofactamine 2000介导FOXQ1干扰质粒转染人膀胱癌细胞株T24细胞；转染48 h后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测FOXQ1、上皮间质标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达改变；细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力；噻唑蓝(MTT)比色法和吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用.结果 与转染NC-shRNA阴性对照组比较,转染FOXQ1-shRNA 48 h后的T24细胞,FOXQ1和间质标记基因N-Cadherin、Vimentin的mRNA或蛋白表达下降,而上皮标记基因E-cadherin的mRNA或蛋白表达显著增加；转染后的T24细胞形态向正常上皮细胞转化,体外迁移能力与侵袭力下降[(15.4±1.4)％比(76.5±1.1)％,P＜0.05]；细胞增殖明显抑制(57.8％比82.7％,P＜0.05),同时细胞凋亡率增加(37.6％比14.2％,P＜0.05).结论 靶向沉默FOXQ1基因可以逆转肿瘤细胞的间质表型向正常上皮表型转化,抑制癌细胞迁移和侵袭,降低肿瘤转移潜能。
其他文献
有研究表明可以通过微电场网(MEFN)改变肺癌细胞A549细胞膜的通透性[1].我们采用MEFN联合吉非替尼,观察其对A549生长抑制及诱导凋亡能力.一、材料与方法1.材料:A549为我院肺癌免疫实验室常规传代培养.微电场网发生仪(MEF-803)购于上海圣太科医疗器械有限公司。
单核巨噬细胞表面Toll样受体4(TLR4)的表达,进一步诱导多种细胞因子的产生是重症急性胰腺炎(SAP)发病机制中的可能环节.本研究旨在观察大黄素干预治疗对SAP大鼠外周血单核细胞TLR4表达的调节作用,探讨其治疗SAP的可能机制.一、材料与方法1.实验动物与主要试剂:选用SPF级雄性SD大鼠,体质量(250 ±50)g,购自武汉大学实验动物中心(动物合格证号Y20110212)。
目的 观察人胆囊癌组织中恶性脑瘤缺失1(DMBT1)基因的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测12例人中晚期胆囊癌及其癌旁正常组织中DMBT1mRNA的相对表达量,并采用Western blot检测上述组织中DMBT1蛋白表达.结果 91.7％(11/12)的胆囊癌组织中DMBT1 mRNA和蛋白表达下调或缺失,而癌旁组织中83.3％(10/12)该基因表达上调和蛋白
目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对兔下腔静脉球囊损伤修复中血管内皮变化的影响.方法 将50只兔随机分为2组(n=25):A组损伤后即刻皮下注射G-CSF 50 μg/kg,连续7d;B组损伤后即刻皮下注射生理盐水(N-S)2 ml,连续7 d.两组均于术后7 d、30 d取损伤血管段,苏木素-伊红(HE)染色观察血管损伤及修复情况,计算内膜(I)、中膜(M)面积比值I/M以评价内膜增生程
微小RNA(miRNA,miR)是1类长约22 nt的非编码单链RNA,它是细胞的内源性物质,普遍存在于动植物中,高度保守,通过与靶基因序列的特异性相互作用,在转录后水平调控基因表达,从而参与多种生理和病理过程,包括细胞增生、分化、凋亡及致癌等过程.近年来的研究表明特定的MiRNA在癫痫发作后神经病变和功能失调中也发挥重要调节作用.现就MiRNA与癫痫的关系研究进展做一综述。
自噬可为机体细胞清除化学致癌物以及因射线、氧化应激而受损的细胞器,从而使细胞DNA避免因活性氧物质而造成的损伤,保证了遗传稳定性,降低了细胞恶变率[1].我们采用Western blot及免疫组织化学法观察自噬相关基因Beclin-1、LC3在前列腺癌、良性前列腺增生发生、发展中的作用.一、材料与方法1.一般资料:手术室收集良性前列腺增生50例及前列腺癌34例组织标本,另选取良性前列腺增生病理标本
胶原蛋白(Coll)具有良好的细胞相容性和组织相容性,在创面愈合、修复及止血中用途广泛[1],但其较差的力学性能,较高的降解速率等特性限制了临床应用.我们对胶原蛋白进行改性,以期得到新型的胶原蛋白支架,并行性能测试.一、材料与方法以鼠尾腱(10g)制备精制Coll液,将Co11(2 g/L)和L-赖氨酸(Lys,5 mmol/L)的混合液37℃孵育3h,加入EDC/NHS(10 mmol/L/10
目的 探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子(Tiam1)在中晚期结直肠癌组织的表达及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学二步法检测Tiam1在126例Ⅱ～Ⅳ期结直肠癌组织和30例正常结直肠组织中的表达,分析其表达与临床病理特征的关系.结果 Tiam1在结直肠癌组织中表达的阳性率明显高于正常结直肠组织(P＜0.01),其中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期阳性表达率分别为42.4％、64.6％、82.1％,差异有统计学
目的 探讨在骨髓源性神经干细胞(NSCs)向神经元分化中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控机制.方法 将36份神经球样本按随机数字法分为4组,孵育3d后分别检测各组间神经元特异性神经特异性烯醇化酶(NSE)的荧光强度、含量及细胞周期中G0/G1的差异.结果 Ⅰ～Ⅳ组NSE的平均荧光强度依次为0.0687±0.0025、0.0449±0.0020、0.0279±0.0012和0.0260±0.
目的 探讨不同胃病变患者的发生发展直至恶变过程中c-myc mRNA的表达与幽门螺杆菌(Hp)感染的相关性及其与胃组织细胞程序性死亡的关系.方法 通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测72例慢性浅表性胃炎(CSG)、55例慢性萎缩性胃炎(CAG)、52例肠化生(IM)、46例不典型增生(AH)、65例胃癌(GC)组织(分别为CSG、CAG、IM、AM、AH、GC组)中c-myc