【摘 要】
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目的研究羧甲基壳聚糖（CMCS）对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用，并探索PI3K/Akt信号转导通路在该过程中的作用及其机制。方法体外培养大鼠膝关节软骨细胞，通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞；3 mmol/L硝普钠诱导软骨细胞构建凋亡模型；实验分为空白对照组、硝普钠诱导凋亡组、硝普钠+不同浓度CMCS处理组、硝普钠+CMCS+PI3K抑制剂Wortmannin处理组。通过细胞增殖检
【机 构】
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目的研究羧甲基壳聚糖（CMCS）对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用，并探索PI3K/Akt信号转导通路在该过程中的作用及其机制。
方法体外培养大鼠膝关节软骨细胞，通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞；3 mmol/L硝普钠诱导软骨细胞构建凋亡模型；实验分为空白对照组、硝普钠诱导凋亡组、硝普钠+不同浓度CMCS处理组、硝普钠+CMCS+PI3K抑制剂Wortmannin处理组。通过细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）对软骨细胞增殖活性进行检测，流式细胞技术检测软骨细胞凋亡率，荧光定量PCR检测软骨细胞内MMP-13及基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）-1 mRNA的表达水平，通过蛋白印迹法检测软骨细胞内Akt及p-Akt表达水平，采用单因素方差分析进行统计学处理。
结果3 mmol/L硝普钠可以抑制软骨细胞增殖活性（吸光度值0.221±0.023），与对照组（0.736±0.032）比较降低70%（F=8.203，P=0.021），诱导软骨细胞发生早期凋亡，早期凋亡率为（68.8±5.2）%；增加软骨细胞内MMP-13 mRNA表达，降低TIMP-1 mRNA表达；加入CMCS后软骨细胞增殖活性有所增加，软骨细胞凋亡降低，凋亡率降低为（14.7±2.3）%；并且CMCS可以激活硝普钠诱导软骨细胞内Akt激活，增加p-Akt蛋白表达水平，CMCS可以恢复硝普钠诱导软骨细胞内MMP-13 mRNA增加及TIMP-1 mRNA降低。
结论CMCS对硝普钠诱导软骨细胞凋亡具有一定的保护作用，PI3K/Akt信号通路的激活在该过程中起重要作用。
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