【摘 要】
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目的 构建人前脑啡肽基因(hPPE)修饰的人胚胎肾细胞(HEK293细胞).方法 重组质粒pcDNA3.1(+)/hPPE经限制性内切酶HindⅢ和Not Ⅰ进行双酶切获得hPPE基因,运用基因重组技术将hPPE基因与表达载体同源重组,转染293T细胞进行慢病毒包装、扩增、纯化,测定病毒滴度,再将重组的慢病毒载体转染HEK293细胞.用Western blot法检测hPPE基因在HEK293细胞中
【机 构】
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030001太原市,山西医科大学第一临床医学院麻醉科,030001太原市,山西医科大学第一临床医学院麻醉科,030001太原市,山西医科大学第一临床医学院麻醉科,030001太原市,山西医科大学第一临
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目的 构建人前脑啡肽基因(hPPE)修饰的人胚胎肾细胞(HEK293细胞).方法 重组质粒pcDNA3.1(+)/hPPE经限制性内切酶HindⅢ和Not Ⅰ进行双酶切获得hPPE基因,运用基因重组技术将hPPE基因与表达载体同源重组,转染293T细胞进行慢病毒包装、扩增、纯化,测定病毒滴度,再将重组的慢病毒载体转染HEK293细胞.用Western blot法检测hPPE基因在HEK293细胞中的表达.结果 重组慢病毒载体阳性克隆测序结果和基因库的hPPE基因序列完全一致.含有hPPE基因的慢病毒载体,滴度为2.07×108TU/ml.转染慢病毒载体后的HEK293细胞,在荧光显微镜下未见到GFP荧光.转染Ubc-GFP-L.V.空病毒载体的HEK293细胞,可见到较强的荧光.Western blot法检测到经慢病毒载体转染后的HEK293细胞中hPPE基因表达呈阳性.结论 成功构建了hPPE基因修饰的HEK293细胞,使hPPE基因可在HEK293细胞中稳定表达。
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脊椎-硬膜外联合麻醉具有起效快、阻滞效果完善和术后可行硬膜外镇痛等优点,广泛用于剖宫产术麻醉,但由于交感神经阻滞和增大的子宫压迫下腔静脉,可导致母体低血压,使胎盘血液灌注减少,有导致胎儿缺血缺氧的风险.麻黄碱和去氧肾上腺素是临床上预防和治疗脊椎-硬膜外联合麻醉下剖宫产术患者低血压的常用药物[1-5].有研究表明,与去氧肾上腺素比较,麻黄碱更易通过胎盘进入胎儿体内,并通过刺激胎儿体内的β肾上腺素能受
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目的 评价盲探气管插管装置联合呼气末二氧化碳监测用于困难气道患者经鼻气管插管的效果.方法 择期经鼻气管插管的口腔颌面外科手术患者60例,性别不限,年龄35-64岁,体重55-75 kg,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,张口度＜3 cm,颈部后仰度＜30°,Mallampati分级Ⅲ或Ⅳ级,甲颏间 距＜6.5 cm,预计为困难气道.采用随机数字表法,将患者随机分为2组(n=30):盲探气管插管装置组(Ⅰ组)和盲
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