【摘 要】
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目的: 克隆并表达有生物学活性的CD40配体(CD40 ligand, CD40L)重组蛋白.方法: 应用PCR技术克隆CD40L胞外功能区(E107-L261)基因, 并在其N端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zip
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目的: 克隆并表达有生物学活性的CD40配体(CD40 ligand, CD40L)重组蛋白.方法: 应用PCR技术克隆CD40L胞外功能区(E107-L261)基因, 并在其N端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper, IZ)促使其形成三聚体活性形式, 同时为了后期纯化的需要, 在IZ的N端融合6个His, 将所融合得到的sCD40L-IZ克隆进入pET30a表达载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3)表达体系进行诱导表达.结果: 重组蛋白sCD40L-IZ以包涵体形式在大肠杆菌(BL21)中得到较高水平的表达.通过蛋白的变性、复性和HiTrapTM亲和层析获得了纯度达95%以上的sCD40L-IZ重组蛋白.经凝胶过滤层析和非还原SDS-PAGE分析验证了其确有三聚体形式.激光共聚焦实验结果表明, 重组蛋白sCD40L-IZ可与骨髓瘤细胞株XG2表面CD40分子结合, 并促使其在膜表面发生聚集.结论: 人sCD40L-IZ重组蛋白在大肠杆菌体系得以成功表达, 并以三聚体活性形式发挥功能, 为今后进一步研究其与凋亡、疾病发病机制的关系及其在临床治疗中的应用奠定了基础.
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