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目的：构建带有Cre重组酶识别位点变异体lox66的针对小鼠HPRT基因的基因打靶载体，并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法：利用含HPRT基因组DNA片段的质粒pMP8和人工合成含lox66序列的寡核苷酸，构建含Cr e重组酶识别位点变异体lox66的置换型打靶载体，经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后，用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞R1株进行基因转染，经G418/6-TG（6-thioguanine）分组药物筛选，进行pSP-HPRT-lox66-Neo载体的应用研究。结果：得到了与设计一致的置换型打靶