人巨细胞病毒gB基因真核表达载体的构建与鉴定

来源 :中国生物制品学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linhom222
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目的 克隆人巨细胞病毒(HCMV)gB基因并构建真核表达载体。方法 根据Genebank中HCMV核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别加入BamHⅠ、XhoⅠ限制性内切酶位点,特异性扩增gB编码基因片段。TA克隆后经双酶切、PCR、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含HCMV gB编码基因的真核表达载体,转染COS7细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)检测该重组真核表达载体在COS7细胞中的表达。结果 重组质粒经BamH Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切成大小为5.0kb与2.7kb的片段,表明表达载体pcD
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