【摘 要】
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棉花组蛋白去泛素化酶GhOTUD5与生殖发育密切相关.为了获得大量可溶性表达的GhOTUD5蛋白,本试验对目的蛋白原核表达条件进行优化.采用分子克隆方法构建重组表达载体pET-22b-G
【机 构】
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山西农业大学农学院,太谷,030801
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棉花组蛋白去泛素化酶GhOTUD5与生殖发育密切相关.为了获得大量可溶性表达的GhOTUD5蛋白,本试验对目的蛋白原核表达条件进行优化.采用分子克隆方法构建重组表达载体pET-22b-GhOTUD5,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)和Transetta (DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导目的蛋白表达.在对影响原核表达的四个单因素(菌体密度OD600,诱导剂IPTG终浓度,诱导时间和诱导温度)分别分析的基础上,设计三水平的正交试验L9(43),摸索大量可溶性目的蛋白表达的最优条件.结果 显示,目的蛋白GhOTUD5在Transetta (DE3)中成功表达,在BL21 (DE3)中不表达.在菌体密度OD600为0.8、诱导温度为28℃、IPTG终浓度为0.7 mmol/L、诱导3h的条件下可溶性目的蛋白表达量最高,达到13％左右.该研究结果为进一步研究GhOTUD5在棉花育性方面的功能提供了科学数据.
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