目的:探讨获得高纯度成年SD大鼠许旺细胞的有效方法。方法:实验于2006-12在武汉理工大学完成。①许旺细胞原代培养:无菌条件下暴露SD大鼠左侧坐骨神经,切断神经,结扎后缝合臀大肌及皮肤。7d后处死大鼠,切取左侧预变性坐骨神经,并取右侧正常坐骨神经做对照,显微镜下尽量去除神经外膜及黏连组织,将神经剪成1mm3的组织块,植入培养瓶中进行培养,组织块间距以1cm为宜。②许旺细胞传代及纯化:培养7d后,将组织转移到新的培养板中继续培养,继之依次应用低浓度酶消化法、差速贴壁分离法去除成纤维细胞,纯化许旺细胞。③许旺细胞的观察和计数:在倒置相差显微镜下观察许旺细胞的形态和增殖情况,定期随机采集细胞图像,并用MTT法测试其增殖能力。④许旺细胞的鉴定:对纯化的许旺细胞进行S-100蛋白酶联免疫细胞化学染色鉴定。结果:①许旺细胞的分离培养和纯化:预变性组许旺细胞密度高于正常对照组,培养7d后两组的密度差别尤为显著。②许旺细胞的形态学观察:许旺细胞为典型的长梭状,具有双极或多级,两端突起较长,汇合成片并交织呈网状。正常对照组细胞密度较低,生长较慢,胞体较长,细胞多呈三角形或多角形。MTT生长曲线显示:预变性组许旺细胞倍增时间为3d,正常为4d。③许旺细胞的免疫化学鉴定:许旺细胞胞体及突起呈棕褐色,而成纤维细胞为扁平状且未着色,呈透明状。预变性组许旺细胞纯度为95%,正常对照组为86%。结论:本实验所采用的组织块反复种植+低浓度酶消化+差速贴壁法分离纯化许旺细胞切实可行,可有效获得大量高纯度许旺细胞。