【摘 要】
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)对人黑素瘤M14细胞系生存素基因表达的抑制作用及对细胞凋亡、增殖和侵袭的影响.方法 构建靶向生存素的siRNA表达质粒,用脂质体法转染M14人黑素瘤
【机 构】
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苏州大学附属第一医院,中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所
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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)对人黑素瘤M14细胞系生存素基因表达的抑制作用及对细胞凋亡、增殖和侵袭的影响.方法 构建靶向生存素的siRNA表达质粒,用脂质体法转染M14人黑素瘤细胞.RT-PCR检测M14细胞生存素mRNA的表达,Western印迹检测生存素蛋白的表达,流式细胞仪检测AnexinV标记的凋亡细胞,噻唑蓝(MTT)法分析细胞增殖,Transwell法分析侵袭能力.结果 与M14细胞和转染空载体的M14细胞比较,转染siRNA的表达质粒可以明显抑制生存素基因在转录和翻译上的表达.M14组和空载体组几乎无凋亡细胞,siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加(x2=31.55,P＜0.01).细胞增殖抑制率(63.6%±1.6%)也明显增加,同时Transwell细胞侵袭实验显示,siRNA表达质粒转染组抑制作用显著.结论 靶向生存素的siRNA表达质粒可以特异性抑制生存素的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭并诱导细胞凋亡.
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