【摘 要】
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目的:以荧光素酶(luciferase,LUC)基因为报告基因,探讨HBV转录后调节序列(HPRE)的功能元件(α、β1和β2)对IFN-α作用的影响.方法:用PCR法从载体pGEM-luc中扩增LUC基因,并克
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院,南京军区军事医学研究所,中国药科大学
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目的:以荧光素酶(luciferase,LUC)基因为报告基因,探讨HBV转录后调节序列(HPRE)的功能元件(α、β1和β2)对IFN-α作用的影响.方法:用PCR法从载体pGEM-luc中扩增LUC基因,并克隆入真核表达载体pcDNA3.0中.以含乙肝病毒(HBV)基因组的质粒A01为模板,扩增HPRE(完整的HPRE)、 HPREαβ1及HPREβ1β2片段,并分别插入LUC基因的下游.利用脂质体介导的转染法,将重组质粒分别导入人肝癌细胞株HepG2中,用LUC检测系统检测IFN-α作用前后LUC表达活性的变化.结果:经测序证实,重组质粒pcDNA3.0-luc、 pcDNA3.0-luc-HPRE、 pcDNA3.0-luc-HPREαβ1及pcDNA3.0-luc-HPREβ1β2构建成功.检测结果显示,IFN-α作用前,HPRE、 HPREαβ1和HPREβ1β2 均能提高LUC的活性,IFN-α作用后,HPRE和HPREβ1β2能明显降低LUC的活性,而HPREαβ1对其表达则没有显著影响.结论:HPRE的功能元件β2与IFN-α作用的关系最为密切,而功能元件α和β1在IFN-α应答中作用甚小,提示IFN-α诱导产生的HPRE抑制性结合蛋白很可能是与β2结合的,为进一步研究IFN-α在治疗HBV感染和慢性肝炎中的作用机制,以及HPRE抑制性结合蛋白的作用提供了一定的实验依据.
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