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摘 要：目的：对比分析爱科来医疗科技（平湖）有限公司与日本东曹株式会社分别研发生产的全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂，评估其临床上的一致性。方法：研究纳入天津医科大学代谢病医院、天津市第二人民医院的临床样本共计269例，针对同一患者身上采集的全血及溶血样本，同时用两种分析系统检测糖化血红蛋白（HbA1c）含量，进行统计分析。结果：针对268例全血样本，卡方检验结果为0.375，Kappa值为0.962，做散点图分析其线性相关性系数r2为0.997;针对265例溶血样本，卡方检验结果为0.063，Kappa值为0.962，做散点图分析其线性相关性系数r2为0.998。分析：两种全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂在检测同一全血或溶血样本时，检测结果显著相关，证明对于同一受试者的不同类型（静脉全血、血清、血浆）样本检测有较高一致性。
关键词：全自动糖化血红蛋白分析仪;HbA1c;糖化血红蛋白;一致性评价
当今社会，糖尿病已成为困扰人类的一大顽疾。人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物是糖化血红蛋白，血红蛋白的糖化发生在红细胞寿命的120天内，所以糖化血红蛋白（HbA1c）常反映数周至数月的平均血糖水平，它不受采血时间、禁食或使用胰岛素的影响。因此，HbA1c被认为是判断糖尿病长期控制情况的良好参数，同时还是糖尿病首选诊断指标[1]。HbA1c的检测结果能客观反映患者近6-8周的血糖代谢水平，是目前国际上公认的可反映糖尿病患者长期血糖控制状况的“金标准”，在临床上被广泛应用[2]。
目前HbA1c常规测定方法有高效液相色谱（HPLC）法、亲和层析法、免疫法、电泳法、酶法等。爱科来医疗科技（平湖）有限公司研发生产的全自动糖化血红蛋白分析仪，是一台国产仪器，能检测稳定型HbA1c、HbF，平均48秒检测一个样本，其基本原理是通过反向阳离子交换层析柱法检测血液中的HbA1c，稀释后的血液样本送到层析柱，层析柱根据高效液相色谱法（HPLC）将样本分离为多种血红蛋白成分，通过双波长比色法检测从层析柱洗脱的各成分，血液在波长420nm附近时有一个特征性吸收峰，吸收强度随血红蛋白浓度增高而增强，而在波长500nm附近时，峰高就不会再特异地发生改变，可消除背景影响，再利用微型计算及处理所得结果，从而获得峰鉴别和含量。在浙江省医疗器械检验研究院进行的注册检验中，用糖化血红蛋白成分标准物质（高、低）作为样本进行检测，分析仪测定结果的相对偏差在±8%范围内;检测样本浓度为4.0%—6.5%（20.2mmol/mol—47.5 mmol/mol）的样本，分析仪重复测量结果变异系数CV均不大于3.0%;在分析仪检测范围3%—20%范围内，检测结果的线性相关系数r不小于0.9900;携带污染率不大于3.0%;开机稳定后8h内，检测同一正常样本结果的相对偏差不超过±3.0%。以上几点证明其在实验室检测时拥有良好性能。
市面上的全自动糖化血红蛋白分析仪一般都具有良好的实验室精密度和室内重复性，但临床结果可能各不相同。本临床研究旨在观察、评价爱科来医疗科技（平湖）有限公司与日本东曹株式会社分别研发生产的全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂，评估其临床结果上的一致性，同时判断国产与进口分析系统间的差距，以期更好的服务于临床科室。
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1样本
按照试验方案要求，在天津医科大学代谢病医院、天津市第二人民医院两家临床单位试验总样本数不低于240例全血样本及其同样的溶血样本。样本均来自于2017年2月至5月，两家机构的临床科室检验剩余样本。
入选标准：年龄在18岁以上，性别不限，随机入组;不得使用碘醋酸抗凝剂的血液样本，可以使用肝素、EDTA-2Na、EDTA-2K、EDTA-3K、NaF等抗凝剂;全血状态下2-8℃冷藏保存3-4日，不使用去除血浆的样本。
排除标准：样本信息不全或样本量不足以完成全部试验的;微生物污染的样本;不符合样本采集和处理要求的样本。
剔除标准：绝对偏倚分析和相对偏倚分析均超出限定（参照NCCLS-EP9-A2要求）[3]。
1.1.2试验设备
爱科来医疗科技（平湖）有限公司生产的全自动糖化血红蛋白分析仪（型号：HA-8180）（注册证编号：浙械注準20172401149），配套试剂为：糖化血红蛋白分析用洗脱液ELUENT 80A、ELUENT 80B、80H等。
日本东曹株式会社生产的Tosoh Automated Glycohemoglobin Analyzer （全自动糖化血红蛋白分析仪）（型号：HLC-723G8）（注册证编号：国食药监械（进）字2014第2402004号），配套试剂为：洗脱缓冲液G8-第1液、G8-第2液、G8-第3液、溶血-洗净液等;
1.2试验伦理及方法
该临床试验分别通过天津医科大学代谢病医院医学伦理委员会、天津市第二人民医院医学研究伦理委员会伦理审查。选取检验科剩余血液样本，同时在两台分析系统上检测HbA1c，以HbA1c≥6.5%作为诊断糖尿病的判断依据，收集数据进行统计分析。本临床试验由两家机构主要研究者负责，与爱科来医疗科技（平湖）有限公司共同制定临床试验方案。按照要求，人员培训完成后，开始进行验证。操作严格按说明书进行，符合说明书结果判定条件的情况时，待测样本结果成立。出现和预期结果不相符时，立即停止试验，待查明原因后，继续进行。试验结束，由专人进行数据统计、整理、核对。
1.3统计学方法
所有数据汇总并通过SPSS 20.0统计学软件按照定性结果及定量结果，分别进行统计，其中定性结果分析计算卡方（McNemar检验）值、Kappa值，定量结果分析计算线性相关性。 将以下几点作为评价标准：卡方分析（McNemar检验）大于0.05、kappa值大于0.75、线性相关分析r2>0.95，以此来评价两个分析系统间的临床一致性。同时，以临床试验过程中是否出现不良事件作为安全性评价指标。
2.结果
2.1全血样本
临床试验两家临床单位共入组270例全血样本，其中代谢病医院有一样本信息记录不清晰导致原始结果不可信，予以排除;天津第二人民医院一例样本检测时系统传输问题导致全血结果不可信，予以排除。故共有268例全血样本入组。
2.1.1定性结果分析
2.1.1.1卡方检验（McNemar检验）
卡方检验中的McNemar检验，p=0.375，>0.05，表明假设H0成立，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果没有差异。
2.1.1.2 KAPPA检验
KAPPA检验结果为0.962，>0.75，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果高度一致。
2.1.2定量结果分析
2.1.2.1 线性相关性
通过作散点图，计算得线性回归的方程为：Y=0.974X+0.041，相关系数r2为0.997。
2.2溶血样本
临床试验两家临床单位共入组270例溶血样本，另外有一例以伯乐高值质控品配制的溶血样本，共271例样本。其中代谢病医院有1样本信息记录不清晰导致原始结果不可信，予以排除;天津市第二人民医院5例样本检测时仪器故障导致溶血结果未检出，予以剔除。故共有265例溶血样本入组。
2.2.1定性结果分析
2.2.1.1卡方检验（McNemar检验）
卡方检验中的McNemar检验，p=0.063，>0.05，表明假设H0成立，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果没有差异。
2.2.1.2 KAPPA检验
KAPPA检验结果为0.962，>0.75，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果高度一致。
2.2.2定量结果分析
2.2.2.1 线性相关性
通过作散点图，计算得线性回归的方程为：Y=0.984X+0.143，相关系数r2为0.998。
3.讨论
本次临床试验实际完成样本共计为270例。经过样本分析，排除或剔除了不合格样本后，全血样本、溶血样本经过两个分析系统间的试验结果比较，两者的检测结果一致性很好。其结果总结如下：
通过本临床试验及统计分析结果，可以看到两种全自动糖化血红蛋白分析仪在检测HbA1c含量时，具有较高的一致性，且临床试验期间未出现不良事件和其他安全性事件。由此可以看到，以以上两款为代表的国产和进口分析系统在检测HbA1c含量时结果高度一致，可为临床科室选择该种分析系统提供参考。
參考文献：
[1] 中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南（2010年版）[J].中国医学前沿杂志，2011，3（6）：54-109.
[2] 宋银丹，段勇.糖化血红蛋白检测标准化的研究进展[J].实验与检验医学，2013，31（2）：108-110.
[3] Clinic and Laboratory Standards Institute.Method comparison and bias estimation using patient sample;approverd guideline，EP9-A[S].Wanye，PA，USA：CLSI，1995.
作者简介：
吴玲丽（1993.04），性别：女，民族：汉族，籍贯（精确到市）：浙江省嘉兴市，当前职务：科员，当前职称：助理工程师，学历：本科，研究方向：生物医学工程.
关键词：全自动糖化血红蛋白分析仪;HbA1c;糖化血红蛋白;一致性评价
当今社会，糖尿病已成为困扰人类的一大顽疾。人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物是糖化血红蛋白，血红蛋白的糖化发生在红细胞寿命的120天内，所以糖化血红蛋白（HbA1c）常反映数周至数月的平均血糖水平，它不受采血时间、禁食或使用胰岛素的影响。因此，HbA1c被认为是判断糖尿病长期控制情况的良好参数，同时还是糖尿病首选诊断指标[1]。HbA1c的检测结果能客观反映患者近6-8周的血糖代谢水平，是目前国际上公认的可反映糖尿病患者长期血糖控制状况的“金标准”，在临床上被广泛应用[2]。
目前HbA1c常规测定方法有高效液相色谱（HPLC）法、亲和层析法、免疫法、电泳法、酶法等。爱科来医疗科技（平湖）有限公司研发生产的全自动糖化血红蛋白分析仪，是一台国产仪器，能检测稳定型HbA1c、HbF，平均48秒检测一个样本，其基本原理是通过反向阳离子交换层析柱法检测血液中的HbA1c，稀释后的血液样本送到层析柱，层析柱根据高效液相色谱法（HPLC）将样本分离为多种血红蛋白成分，通过双波长比色法检测从层析柱洗脱的各成分，血液在波长420nm附近时有一个特征性吸收峰，吸收强度随血红蛋白浓度增高而增强，而在波长500nm附近时，峰高就不会再特异地发生改变，可消除背景影响，再利用微型计算及处理所得结果，从而获得峰鉴别和含量。在浙江省医疗器械检验研究院进行的注册检验中，用糖化血红蛋白成分标准物质（高、低）作为样本进行检测，分析仪测定结果的相对偏差在±8%范围内;检测样本浓度为4.0%—6.5%（20.2mmol/mol—47.5 mmol/mol）的样本，分析仪重复测量结果变异系数CV均不大于3.0%;在分析仪检测范围3%—20%范围内，检测结果的线性相关系数r不小于0.9900;携带污染率不大于3.0%;开机稳定后8h内，检测同一正常样本结果的相对偏差不超过±3.0%。以上几点证明其在实验室检测时拥有良好性能。
市面上的全自动糖化血红蛋白分析仪一般都具有良好的实验室精密度和室内重复性，但临床结果可能各不相同。本临床研究旨在观察、评价爱科来医疗科技（平湖）有限公司与日本东曹株式会社分别研发生产的全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂，评估其临床结果上的一致性，同时判断国产与进口分析系统间的差距，以期更好的服务于临床科室。
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1样本
按照试验方案要求，在天津医科大学代谢病医院、天津市第二人民医院两家临床单位试验总样本数不低于240例全血样本及其同样的溶血样本。样本均来自于2017年2月至5月，两家机构的临床科室检验剩余样本。
入选标准：年龄在18岁以上，性别不限，随机入组;不得使用碘醋酸抗凝剂的血液样本，可以使用肝素、EDTA-2Na、EDTA-2K、EDTA-3K、NaF等抗凝剂;全血状态下2-8℃冷藏保存3-4日，不使用去除血浆的样本。
排除标准：样本信息不全或样本量不足以完成全部试验的;微生物污染的样本;不符合样本采集和处理要求的样本。
剔除标准：绝对偏倚分析和相对偏倚分析均超出限定（参照NCCLS-EP9-A2要求）[3]。
1.1.2试验设备
爱科来医疗科技（平湖）有限公司生产的全自动糖化血红蛋白分析仪（型号：HA-8180）（注册证编号：浙械注準20172401149），配套试剂为：糖化血红蛋白分析用洗脱液ELUENT 80A、ELUENT 80B、80H等。
日本东曹株式会社生产的Tosoh Automated Glycohemoglobin Analyzer （全自动糖化血红蛋白分析仪）（型号：HLC-723G8）（注册证编号：国食药监械（进）字2014第2402004号），配套试剂为：洗脱缓冲液G8-第1液、G8-第2液、G8-第3液、溶血-洗净液等;
1.2试验伦理及方法
该临床试验分别通过天津医科大学代谢病医院医学伦理委员会、天津市第二人民医院医学研究伦理委员会伦理审查。选取检验科剩余血液样本，同时在两台分析系统上检测HbA1c，以HbA1c≥6.5%作为诊断糖尿病的判断依据，收集数据进行统计分析。本临床试验由两家机构主要研究者负责，与爱科来医疗科技（平湖）有限公司共同制定临床试验方案。按照要求，人员培训完成后，开始进行验证。操作严格按说明书进行，符合说明书结果判定条件的情况时，待测样本结果成立。出现和预期结果不相符时，立即停止试验，待查明原因后，继续进行。试验结束，由专人进行数据统计、整理、核对。
1.3统计学方法
所有数据汇总并通过SPSS 20.0统计学软件按照定性结果及定量结果，分别进行统计，其中定性结果分析计算卡方（McNemar检验）值、Kappa值，定量结果分析计算线性相关性。 将以下几点作为评价标准：卡方分析（McNemar检验）大于0.05、kappa值大于0.75、线性相关分析r2>0.95，以此来评价两个分析系统间的临床一致性。同时，以临床试验过程中是否出现不良事件作为安全性评价指标。
2.结果
2.1全血样本
临床试验两家临床单位共入组270例全血样本，其中代谢病医院有一样本信息记录不清晰导致原始结果不可信，予以排除;天津第二人民医院一例样本检测时系统传输问题导致全血结果不可信，予以排除。故共有268例全血样本入组。
2.1.1定性结果分析
2.1.1.1卡方检验（McNemar检验）
卡方检验中的McNemar检验，p=0.375，>0.05，表明假设H0成立，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果没有差异。
2.1.1.2 KAPPA检验
KAPPA检验结果为0.962，>0.75，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果高度一致。
2.1.2定量结果分析
2.1.2.1 线性相关性
通过作散点图，计算得线性回归的方程为：Y=0.974X+0.041，相关系数r2为0.997。
2.2溶血样本
临床试验两家临床单位共入组270例溶血样本，另外有一例以伯乐高值质控品配制的溶血样本，共271例样本。其中代谢病医院有1样本信息记录不清晰导致原始结果不可信，予以排除;天津市第二人民医院5例样本检测时仪器故障导致溶血结果未检出，予以剔除。故共有265例溶血样本入组。
2.2.1定性结果分析
2.2.1.1卡方检验（McNemar检验）
卡方检验中的McNemar检验，p=0.063，>0.05，表明假设H0成立，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果没有差异。
2.2.1.2 KAPPA检验
KAPPA检验结果为0.962，>0.75，两种分析系统在检测HbA1c含量时，结果高度一致。
2.2.2定量结果分析
2.2.2.1 线性相关性
通过作散点图，计算得线性回归的方程为：Y=0.984X+0.143，相关系数r2为0.998。
3.讨论
本次临床试验实际完成样本共计为270例。经过样本分析，排除或剔除了不合格样本后，全血样本、溶血样本经过两个分析系统间的试验结果比较，两者的检测结果一致性很好。其结果总结如下：
通过本临床试验及统计分析结果，可以看到两种全自动糖化血红蛋白分析仪在检测HbA1c含量时，具有较高的一致性，且临床试验期间未出现不良事件和其他安全性事件。由此可以看到，以以上两款为代表的国产和进口分析系统在检测HbA1c含量时结果高度一致，可为临床科室选择该种分析系统提供参考。
參考文献：
[1] 中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南（2010年版）[J].中国医学前沿杂志，2011，3（6）：54-109.
[2] 宋银丹，段勇.糖化血红蛋白检测标准化的研究进展[J].实验与检验医学，2013，31（2）：108-110.
[3] Clinic and Laboratory Standards Institute.Method comparison and bias estimation using patient sample;approverd guideline，EP9-A[S].Wanye，PA，USA：CLSI，1995.
作者简介：
吴玲丽（1993.04），性别：女，民族：汉族，籍贯（精确到市）：浙江省嘉兴市，当前职务：科员，当前职称：助理工程师，学历：本科，研究方向：生物医学工程.