【摘 要】
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目的 观察慢病毒载体(Lentiviral vector,LV)对犬生殖细胞的转染,为基于LV的精子介导法制备转基因动物提供依据.方法 采用睾丸打点注射法,向比格犬两侧睾丸分别注入滴度为5×
【机 构】
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内蒙古民族大学附属医院,首都医科大学基础医学院
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目的 观察慢病毒载体(Lentiviral vector,LV)对犬生殖细胞的转染,为基于LV的精子介导法制备转基因动物提供依据.方法 采用睾丸打点注射法,向比格犬两侧睾丸分别注入滴度为5×108、1×108、2×107 TU/mL的慢病毒液组成3个剂量组,每点注射量为每只犬0.2 mL.于注射后第2周开始采集精液,通过精液DNA的PCR检测和精子荧光镜检评估绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的整合及表达.结果 1)在高剂量组,整合并表达GFP基因的精子于第4周首现并持续至第17周；在中、低剂量组于第5周首现,分别持续到第14周、12周.2)GFP表达的高峰期在注射后第7周～10周.3)GFP表达于整个精子,以顶体后区和精子尾颈部表达最强.4)注射后第2周～6周,中剂量组犬采精困难,高低剂量组犬精子畸形率有上升的趋势.5)在GFP表达的高峰期,绿色荧光精子的百分率在高、中、低剂量组分别为43.33％、35.53％和4.55％,具有明显的差异.结论 基于LV的精子介导转基因法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)可成功获得转基因犬精子,转基因阳性率、表达的强度与持续时间与慢病毒滴度相关.
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