青石斑鱼胃蛋白酶原的分离纯化及酶学性质

来源 :水产学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shengli1011
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采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel,DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、SP-Sepharose阳离子交换柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析,从青石斑鱼的胃中分离纯化到3种胃蛋白酶原(PG-1、PG-2和PG-3),SDS-PAGE结果显示,它们的分子量分别为35、36和37 ku。在pH 2.0下,3种胃蛋白酶原转化为有活性的胃蛋白酶P-1、P-2和P-3,分子量分别约为33、33和34 ku。3种酶的最适pH分别为3.0、2.5和2.5,最适温度均为40℃,且均能被典型的天冬氨酸蛋白酶抑制剂pepstatin A有效抑制。免疫交叉反应结果表明,3种胃蛋白酶原能与大鼠抗黄鳍鲷PG-Ⅰ,PG-Ⅱ,PG-3b,PG-3a,PG-4a及PG-4b多克隆抗体发生不同程度的免疫交叉反应。动力学参数测定结果表明,P-1、P-2和P-3对酸变性牛血红蛋白的Km、kcat及kcat/Km值分别为7.0×10-5 mol/L,17.6 S-1,2.5×105 mol/(L.S);5.5×10-5 mol/L,22.8 S-1,4.1×105 mol/(L.S)和5.2×10-5 mol/L,18.7 S-1,3.6×105 mol/(L.S)。
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