【摘 要】
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目的 对七筋菇基因组DNA提取和ISSR-PCR扩增模板浓度进行优化.方法 以常规的CTAB法为基础,对七筋菇基因组DNA提取进行了优化:提取液中加入PVP(6%(w/v)),β-巯基乙醇的浓度提
【基金项目】
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高等学校博士学科点专项科研项目;
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目的 对七筋菇基因组DNA提取和ISSR-PCR扩增模板浓度进行优化.方法 以常规的CTAB法为基础,对七筋菇基因组DNA提取进行了优化:提取液中加入PVP(6%(w/v)),β-巯基乙醇的浓度提高至5%(w/v);第一次抽提后,重新加入提取液及抗坏血酸(20%(w/v)),65%水浴30min.结果 所提样品DNA,A260/280,A260/230的平均光吸收值分别为1.78,1.99,浓度为105ng/μL左右,ISSR扩增带多且清晰明亮,稳定性及多态性高,表明DNA纯度高;对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明,所提DNA模板稀释2倍效果最好(浓度为50ng/μL).结论 改良后的CTAB法适于提取七筋菇植物的基因组DNA.
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