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真核表达系统因具有完整的翻译后修饰、表达蛋白免疫原性较小而成为制药行业生产蛋白药物的新方向。该研究目的是构建CD137L融合基因真核表达载体,瞬时转染HEK293F细胞实现高效表达并进行蛋白纯化与活性分析。以该实验室保存的含有CD137L融合基因的质粒p ET11a-FP为模板,采用PCR技术在目的基因N端添加长腹水蚤荧光素酶信号肽和Kozak基因序列、C端添加6×His纯化标签,使用XbaⅠ、EcoRⅠ限制性内切酶酶切并插入pc DNA3.1(+)载体,并对其进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂PEI将构