目的优化b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)的发酵工艺,以提高Hib荚膜多糖的产率。方法通过考察初始pH值和葡萄糖浓度对培养液菌体浓度(A550值)及多糖产率的影响,优化摇瓶培养条件;通过考察溶氧百分比、恒定pH值及补加葡萄糖对Hib生长和多糖产率的影响,优化20 L发酵罐的培养条件。以优化的发酵工艺连续进行3批Hib发酵,考察优化发酵工艺的稳定性。结果优化的摇瓶培养条件为:初始pH值为7.2,初始葡萄糖浓度为6 g/L。优化的发酵工艺为:溶氧百分比控制在20%,控制pH值恒定为7.2,于接种后5 h开始补加200 g/L葡萄糖,速率为3 ml/min。与优化前相比,Hib对数生长期由8 h延长至10 h左右,菌体终浓度(A550值)由1.5提高至3.4,Hib荚膜多糖产率由63 mg/L提高至96 mg/L。以优化的发酵工艺培养的3批Hib培养物菌体终浓度(A550值)在3.3～3.7之间,多糖产率在92～98 mg/L之间,稳定性较好。结论优化的发酵工艺可延长Hib对数生长期、促进菌体生长、提高荚膜多糖产率。