【摘 要】
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由于猪的诸多生理和遗传特征与人类近似，猪一直被认为是理想的异种器官移植候选供体动物。但是物种之间严重的免疫不相容是影响猪到灵长类异种器官移植的最关键因素。为了克服物种之间的免疫排斥反应，诸多研究对猪进行了各种各样的基因修饰，消除或抑制造成异种器官移植的免疫原，以获得可应用于灵长类移植的供体器官。本研究利用转录激活因子样效应物核酸酶（transcription activator-like effe
【基金项目】
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National Natural Science Foundation of China （81941001）； Natural Science Foundation of Guangdong Province,China （2019A1515110283）； Science and Technology Planning
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由于猪的诸多生理和遗传特征与人类近似，猪一直被认为是理想的异种器官移植候选供体动物。但是物种之间严重的免疫不相容是影响猪到灵长类异种器官移植的最关键因素。为了克服物种之间的免疫排斥反应，诸多研究对猪进行了各种各样的基因修饰，消除或抑制造成异种器官移植的免疫原，以获得可应用于灵长类移植的供体器官。本研究利用转录激活因子样效应物核酸酶（transcription activator-like effector nuclease,TALEN）对猪的α-1,3-半乳糖苷转移酶（α-1,3-galactosyltransferase, GGTA1）基因进行敲除，该基因编码的酶催化合成α-1,3-半乳糖,这是导致猪到灵长类异种器官移植中产生超急性免疫排斥的关键因子。同时本研究也通过转基因方法导入一种重要的免疫抑制因子，人类白细胞抗原G5 （human leukocyte antigen-G5, HLA-G5），来进一步增加猪器官在异种器官移植中的免疫耐受。本研究筛选了GGTA1双等位基因敲除（GGTA1 knockout,GTKO）且HLA-G5转基因导入的猪成纤维细胞，并通过体细胞核移植（somaticcell nuclear transfer, SCNT）构建相应的基因修饰猪模型。本研究获得了20头GGTA1双等位基因敲除的克隆猪，其中10头同时表达HLA-G5蛋白。经检测，α-1,3-半乳糖在GTKO/HLA-G5克隆猪的组织和细胞上完全缺失，Western blotting和免疫荧光染色显示，HLA-G5在克隆猪的组织和细胞上成功表达。功能学分析显示，从GTKO/HLA-G5克隆猪分离的成纤维细胞具有更好的免疫耐受，相比于单一的GTKO猪和未经基因修饰的野生型猪，GTKO/HLA-G5克隆猪的细胞对补体介导的细胞裂解反应具有更强的耐受。GTKO/HLA-G5克隆猪可以为异种器官移植提供一种有用的动物模型。
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