【摘 要】
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为了研究磷酸铵镁（MAP）对羊肾小管上皮细胞（RTECs）的损伤作用，取20份结石羊尿沉渣进行镜检，并观察肾脏组织病理变化；其中在14份尿沉渣中观察到磷酸铵镁晶体，肾组织结构严重受损，RTECs变性坏死。观察尿结石羊症状并采集样品进行实验室检测。胶原酶组织块消化法分离培养羊RTECs,角蛋白18进行鉴定。MAP分别处理羊RTECs 12,24和48 h, CCK-8法检测羊RTECs的活力，Wes
【基金项目】
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国家重点研发计划资助项目（2018YFD0502106）；
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为了研究磷酸铵镁（MAP）对羊肾小管上皮细胞（RTECs）的损伤作用，取20份结石羊尿沉渣进行镜检，并观察肾脏组织病理变化；其中在14份尿沉渣中观察到磷酸铵镁晶体，肾组织结构严重受损，RTECs变性坏死。观察尿结石羊症状并采集样品进行实验室检测。胶原酶组织块消化法分离培养羊RTECs,角蛋白18进行鉴定。MAP分别处理羊RTECs 12,24和48 h, CCK-8法检测羊RTECs的活力，Western blot法检测羊RTECs NF-κB信号通路的表达及Caspase-3、Bcl-2和Bax的水平，ELISA法检测细胞上清中IL-6和TNF-α的水平及LDH表达量。结果显示，尿结石羊尿液pH值比健康羊高，血液和尿液镁离子和磷离子水平也明显升高。胶原酶消化能获得较多且完整的肾小管节段，12 d左右细胞融合达80%～90%,呈典型的铺路石状，纯化后95%以上细胞CK-18鉴定为阳性。MAP能显著降低羊RTECs的活力，使IL-6和TNF-α的表达增加，细胞LDH含量增多。MAP组羊RTECs p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白相对表达量增加，凋亡蛋白Caspase-3的表达明显增加，Bcl-2/Bax比值降低。综上所述，MAP能导致羊RTECs炎症反应与损伤，激活NF-κB通路，诱导细胞的凋亡。
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