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【摘要】通过高效液相色谱法检测原理，通过对7.6%丁硫克百威·戊唑醇悬浮种衣剂的检测试验，制定出相应的检测标准。【关键词】丁硫克百威 戊唑醇 悬浮种衣剂 检测方法
1 概述
种衣剂（Seed Dressing）是在原有农药剂型（如SC、EW、DF、WP、CS、SL）基础上，辅之以成膜成分，并根据需要添加如微肥、激素等成分制作而成。种衣剂作为用来给农作物种子包衣的一种农药对于提高农作物产量，实现农业可持续发展具有重要作用。
甲拌磷、克百威由于具有较高毒性，用于种衣剂制作对人、畜安全威胁很大。丁硫克百威（Carbosulfan）毒化低，属于高效安全、使用方便的杀虫杀螨剂，是剧毒农药克百威的立项替代品，对作物无害。而且还有促进作物生长，提前成熟等积极作用。戊唑醇（Tebuconazole）属于三唑类的杀菌剂，是甾醇脱早基抑制剂，是用于重要经济作物的种子处理或面喷洒的高效杀菌剂，可有效地防治禾谷类作物的多种锈病、白粉病、网斑病、根腐病、赤霉病，黑穗病及种传轮斑病等有特效，因此被广泛用于玉米、小麦等农作物的拌种使用。两者复配，一方面可以对地下害虫具有很好的杀灭效果，另一方面药效的发挥对农作物防病也起到积极作用。因此，本人通过高效液相色谱法检测7.6%丁硫克百威·戊唑醇悬浮种衣剂的方法并制定出相应的标准。
2 原理
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
3 检测技术指标
3.1 成分结构式及物化参数3.1.1 丁硫克百威
ISO通用名称：carbosulfan
化学名称： 2，3-二氢-2，2-二甲基苯并呋喃-7-基（二丁基氨基硫）甲基氨基甲酸酯
结构式：
相对分子质量（按2007年国际相对原子质量计）：380.55
生物活性：杀虫
沸点：（124～128）℃密度（20℃）：1.056溶解度：几乎不溶于水，溶于大多有机溶剂。
稳定性：在酸性介质中，N-S键断裂而转化成一定数量的互变异构体，在中性或微碱性环境中稳定，高温时部分分解。
3.1.2 戊唑醇
ISO通用名称：tebuconazole
化学名称：1-（4-氯苯基）-3-（1H-1，2，4-三唑-1-基甲基）-4，4-二甲基戊-3-醇
结构式：
实验式：C16H22N3OCl
相对分子质量（按2007年国际相對原子质量计）：323.5
生物活性：杀菌熔点：102.4℃
蒸汽压（20℃）：0.013mPa
溶解度（mg/L，20℃）：32
稳定性：在PH4、7和9时，在22℃条件下水解半衰期>1年。在土壤中的半衰期为1～4个月。
3.2 检测材料
3.2.1 仪器及试剂
仪器：高效液相色谱仪：具可调波长紫外检测器；色谱工作站；色谱柱：150mm×6.0mm（id）不锈钢柱，内装Shimpack CLC-ODS填充物；超声波清洗器。试剂及溶液：甲醇：HPLC；水：二次蒸馏水；丁硫克百威标准品：≥98.0%；克百威标准品：≥98.0%；戊唑醇标准品：≥99.0%。
4.1 测定方法
试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以Shim-pack CLC-ODS 为填充物的不锈钢柱和紫外可调波长检测器，对试样中的丁硫克百威、克百威、戊唑醇进行高效液相色谱分离和测定。
4.2 测定步骤
4.2.1 标样溶液的配制
准确称取丁硫克百威标准品50mg及戊唑醇标准品30mg（准至0.2mg）于同一100mL容量瓶中，加入约80mL甲醇，用超声波清洗器振荡10min，使其完全溶解。取出放至室温后，用甲醇定容，摇匀备用。
准确称取克百威标准品30mg（准至0.2mg）于另一100mL容量瓶中，加入约80mL甲醇，用超声波清洗器振荡10min，使其完全溶解。取出放至室温后，用甲醇定容，摇匀备用。
4.2.2 试样溶液的配制
将样品混匀后，准确称取1.5g（准至0.2mg）样品于100mL容量瓶中，加入约80mL甲醇，用超声波清洗器振荡10min，使其完全溶解。取出放至室温后，用甲醇定容，摇匀。将部分溶液转移至10mg离心管中，用2000r/min的速度离心至澄清，备用。
4.2.3 测定
在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，待相邻两针的相对响应值变化小于1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
5 结果
5.1 有效成份及杂质的测定
有效成分丁硫克百威、戊唑醇及杂质克百威，采用高效液相色谱法测定。试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以Shimpack CLC-ODS为填充物的不锈钢柱和紫外可调波长检测器，对试样中的丁硫克百威、戊唑醇和克百威进行高效液相色谱分离和测定。
由表1、表2中数据可知，选择高效液相色谱法测定7.6%丁硫克百威·戊唑醇悬浮种衣剂中丁硫克百威和戊唑醇的含量，回收率试验数据和精密度试验数据均符合常规要求。5.2 杂质克百威的测定：
杂质克百威含量与有效成分含量测定同时进行，采用高效液相色谱法测定。试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以Shim-pack CLC-ODS为填充物的不锈钢柱和紫外可调波长检测器，对试样中的克百威进行高效液相色谱分离和测定。
5.3 计算
有效成分丁硫克百威（戊唑醇）及杂质克百威的质量百分含量X1按式（1）计算：（式1）
式中：
A1——标样溶液中，丁硫克百威（戊唑醇、克百威）峰面积的平均值；
A2——试样溶液中，丁硫克百威（戊唑醇、克百威）峰面积的平均值；
m1——标样溶液中，丁硫克百威（戊唑醇、克百威）标准品的质量；
m2——样品的质量，g；
P——丁硫克百威（戊唑醇、克百威）标准品的百分含量，%。5.4 允许差
二次平行测定结果之差丁硫克百威应不大于0.4%、戊唑醇应不大于0.05%、克百威不大于0.01%。
6 结论
高效液相色谱法检测7.6%丁硫克百威·戊唑醇悬浮种衣剂在相同的色谱操作条件下，试样溶液中某一色谱主峰的保留时间与标样中丁硫克百威、克百威、戊唑醇色谱峰的保留时间，其相对差值在1.5%以内。本鉴别试验可与有效成分丁硫克百威、戊唑醇及杂质克百威含量的测定同时进行。
作者简介
张强，男，1973-，本科，汉族，江苏铜山，工程师，主要从事农药剂型加工技术、农药助剂系统开发究、农药检测方法等方面研究。
1 概述
种衣剂（Seed Dressing）是在原有农药剂型（如SC、EW、DF、WP、CS、SL）基础上，辅之以成膜成分，并根据需要添加如微肥、激素等成分制作而成。种衣剂作为用来给农作物种子包衣的一种农药对于提高农作物产量，实现农业可持续发展具有重要作用。
甲拌磷、克百威由于具有较高毒性，用于种衣剂制作对人、畜安全威胁很大。丁硫克百威（Carbosulfan）毒化低，属于高效安全、使用方便的杀虫杀螨剂，是剧毒农药克百威的立项替代品，对作物无害。而且还有促进作物生长，提前成熟等积极作用。戊唑醇（Tebuconazole）属于三唑类的杀菌剂，是甾醇脱早基抑制剂，是用于重要经济作物的种子处理或面喷洒的高效杀菌剂，可有效地防治禾谷类作物的多种锈病、白粉病、网斑病、根腐病、赤霉病，黑穗病及种传轮斑病等有特效，因此被广泛用于玉米、小麦等农作物的拌种使用。两者复配，一方面可以对地下害虫具有很好的杀灭效果，另一方面药效的发挥对农作物防病也起到积极作用。因此，本人通过高效液相色谱法检测7.6%丁硫克百威·戊唑醇悬浮种衣剂的方法并制定出相应的标准。
2 原理
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
3 检测技术指标
3.1 成分结构式及物化参数3.1.1 丁硫克百威
ISO通用名称：carbosulfan
化学名称： 2，3-二氢-2，2-二甲基苯并呋喃-7-基（二丁基氨基硫）甲基氨基甲酸酯
结构式：
相对分子质量（按2007年国际相对原子质量计）：380.55
生物活性：杀虫
沸点：（124～128）℃密度（20℃）：1.056溶解度：几乎不溶于水，溶于大多有机溶剂。
稳定性：在酸性介质中，N-S键断裂而转化成一定数量的互变异构体，在中性或微碱性环境中稳定，高温时部分分解。
3.1.2 戊唑醇
ISO通用名称：tebuconazole
化学名称：1-（4-氯苯基）-3-（1H-1，2，4-三唑-1-基甲基）-4，4-二甲基戊-3-醇
结构式：
实验式：C16H22N3OCl
相对分子质量（按2007年国际相對原子质量计）：323.5
生物活性：杀菌熔点：102.4℃
蒸汽压（20℃）：0.013mPa
溶解度（mg/L，20℃）：32
稳定性：在PH4、7和9时，在22℃条件下水解半衰期>1年。在土壤中的半衰期为1～4个月。
3.2 检测材料
3.2.1 仪器及试剂
仪器：高效液相色谱仪：具可调波长紫外检测器；色谱工作站；色谱柱：150mm×6.0mm（id）不锈钢柱，内装Shimpack CLC-ODS填充物；超声波清洗器。试剂及溶液：甲醇：HPLC；水：二次蒸馏水；丁硫克百威标准品：≥98.0%；克百威标准品：≥98.0%；戊唑醇标准品：≥99.0%。
4.1 测定方法
试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以Shim-pack CLC-ODS 为填充物的不锈钢柱和紫外可调波长检测器，对试样中的丁硫克百威、克百威、戊唑醇进行高效液相色谱分离和测定。
4.2 测定步骤
4.2.1 标样溶液的配制
准确称取丁硫克百威标准品50mg及戊唑醇标准品30mg（准至0.2mg）于同一100mL容量瓶中，加入约80mL甲醇，用超声波清洗器振荡10min，使其完全溶解。取出放至室温后，用甲醇定容，摇匀备用。
准确称取克百威标准品30mg（准至0.2mg）于另一100mL容量瓶中，加入约80mL甲醇，用超声波清洗器振荡10min，使其完全溶解。取出放至室温后，用甲醇定容，摇匀备用。
4.2.2 试样溶液的配制
将样品混匀后，准确称取1.5g（准至0.2mg）样品于100mL容量瓶中，加入约80mL甲醇，用超声波清洗器振荡10min，使其完全溶解。取出放至室温后，用甲醇定容，摇匀。将部分溶液转移至10mg离心管中，用2000r/min的速度离心至澄清，备用。
4.2.3 测定
在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，待相邻两针的相对响应值变化小于1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
5 结果
5.1 有效成份及杂质的测定
有效成分丁硫克百威、戊唑醇及杂质克百威，采用高效液相色谱法测定。试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以Shimpack CLC-ODS为填充物的不锈钢柱和紫外可调波长检测器，对试样中的丁硫克百威、戊唑醇和克百威进行高效液相色谱分离和测定。
由表1、表2中数据可知，选择高效液相色谱法测定7.6%丁硫克百威·戊唑醇悬浮种衣剂中丁硫克百威和戊唑醇的含量，回收率试验数据和精密度试验数据均符合常规要求。5.2 杂质克百威的测定：
杂质克百威含量与有效成分含量测定同时进行，采用高效液相色谱法测定。试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以Shim-pack CLC-ODS为填充物的不锈钢柱和紫外可调波长检测器，对试样中的克百威进行高效液相色谱分离和测定。
5.3 计算
有效成分丁硫克百威（戊唑醇）及杂质克百威的质量百分含量X1按式（1）计算：（式1）
式中：
A1——标样溶液中，丁硫克百威（戊唑醇、克百威）峰面积的平均值；
A2——试样溶液中，丁硫克百威（戊唑醇、克百威）峰面积的平均值；
m1——标样溶液中，丁硫克百威（戊唑醇、克百威）标准品的质量；
m2——样品的质量，g；
P——丁硫克百威（戊唑醇、克百威）标准品的百分含量，%。5.4 允许差
二次平行测定结果之差丁硫克百威应不大于0.4%、戊唑醇应不大于0.05%、克百威不大于0.01%。
6 结论
高效液相色谱法检测7.6%丁硫克百威·戊唑醇悬浮种衣剂在相同的色谱操作条件下，试样溶液中某一色谱主峰的保留时间与标样中丁硫克百威、克百威、戊唑醇色谱峰的保留时间，其相对差值在1.5%以内。本鉴别试验可与有效成分丁硫克百威、戊唑醇及杂质克百威含量的测定同时进行。
作者简介
张强，男，1973-，本科，汉族，江苏铜山，工程师，主要从事农药剂型加工技术、农药助剂系统开发究、农药检测方法等方面研究。