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目的 构建可表达丙型肝炎病毒(HCV)NS5B-EGFP融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的HepG2细胞系.方法利用PCR技术从HCV基因组中扩增出ns5b基因片段,XhoI/Kpn I双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP-N3真核表达载体,转化TG1菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒pEGFPN3-ns5b.将阳性克隆用脂质体法转染HepG2细胞,经持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系.结果成功构建了真核表达载体pEGFPN3-ns5b;建立了其重组质粒稳定转染的HepG2细胞系.结论重组质粒稳定转染的HepG2细胞系可表达NS5B-EGFP融合蛋白;该HepG2细胞系可以应用于以ns5b基因为靶位的抗HCV感染研究。