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目的
探讨硫酸吲哚酚(IS)对心肌成纤维细胞微小RNA-21(miRNA-21)表达的影响,并探讨miRNA-21对心肌成纤维细胞旁分泌的作用。
方法小鼠心肌成纤维细胞分成空白对照组和IS组培养48 h,实时荧光定量PCR法检测miRNA-21的表达。采用RNA干扰技术沉默miRNA-21表达,将小鼠心肌成纤维细胞分成:血肌酐(Scr)组(Scr处理48 h)、Scr+IS组(Scr+50 μmol/L IS处理48 h),Scr+miRNA-21抑制物组(miRNA-21抑制物处理24 h后加Scr处理48 h)和Scr+miRNA-21抑制物+IS组(miRNA-21抑制物处理24 h后加Scr和IS处理48 h)。采用ELISA及Western印迹分别检测细胞外白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达及细胞内转化生长因子β(TGF-β)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶1的组织抑制因子(TIMP1)的蛋白表达。
结果与空白对照组比较,IS组心肌成纤维细胞miRNA-21的表达增加(P<0.01)。与Scr组比较,Scr+IS组IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β、MMP2、MMP9表达均升高(均P<0.05),TIMP1表达降低(P<0.05);与Scr+IS组比较,Scr+miRNA-21抑制物+IS组IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β、MMP2表达均降低,TIMP1表达也进一步下降(均P<0.05)。
结论尿毒症毒素IS可以促进心肌成纤维细胞miRNA-21的表达上调,miRNA-21参与调节心肌成纤维细胞炎性因子、促纤维化因子等的分泌。