观察人膀胱尿路上皮癌T24细胞中整合素连接激酶(ILK)基因的表达,通过ILK-小干扰RNA(siRNA)转染模型验证人膀胱尿路上皮癌细胞中ILK基因沉默与膀胱尿路上皮癌细胞生物特性之间的关系。
方法选择人尿路上皮癌T24细胞(中国科学院细胞库)进行体外实验,通过构建一套ILK-siRNA转染模型,转染T24细胞并通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测出最有效的干扰序列,将T24细胞分为3组,即膀胱尿路上皮癌T24细胞组(阴性对照组)、膀胱尿路上皮癌T24细胞阴性转染组(阴性转染组)和膀胱尿路上皮癌T24细胞+ILK-siRNA组(目的转染组),分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)的方法定量检测3组细胞中ILK mRNA和ILK的表达。采用流式细胞术、噻唑蓝(MTT)法分别检测3组细胞的细胞增殖能力和凋亡率,进行细胞侵袭、迁移实验。实验数据以均值±标准差(Mean±SD)表示。组间比较采用t检验。
结果3组细胞流式细胞术检测(亚G0/G1期、G0/G1期)为(3.16%、45.55%)、(3.23%、46.65%)、(7.86%、55.43%)。MTT法细胞存活率目的转染组(0.687±0.008)%、阴性对照组(0.998±0.006)%、阴性转染组(0.992±0.008)%比较,差异有统计学意义(阴性对照组t=55.408,P<0.05,阴性转染组t=48.160,P<0.05)。肿瘤细胞侵袭实验倒置显微镜400倍镜视野下细胞计数目的转染组(29.500±2.121)个、阴性对照组(55.501±4.950)个、阴性转染组(54.000±1.414)个,差异有统计学意义(阴性对照组t=6.828,P<0.05,阴性转染组t=13.590,P<0.05)。肿瘤细胞迁移实验倒置显微镜400倍镜视野下细胞计数目的转染组(44.500±2.828)个、阴性对照组(89.001±4.243)个、阴性转染组(87.000±2.828)个,差异有统计学意义(阴性对照组t=11.395,P<0.05,阴性转染组t=13.275,P<0.05)。
结论沉默ILK基因的表达具有抑制T24增殖、侵袭、迁移的功能,同时能够提高T24细胞的凋亡率。