【摘 要】
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目的观察不同浓度脂多糖（lippopolysaccharide, LPS）对肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体动力学相关蛋白1（dynamin related protein 1, Drp1）依赖的线粒体自噬的影响,探讨LPS制作脓毒症急性肺损伤模型的合适浓度。方法对数生长期A549细胞分为对照组、5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组,5
【基金项目】
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国家自然科学基金（81670075）；
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目的观察不同浓度脂多糖（lippopolysaccharide, LPS）对肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体动力学相关蛋白1（dynamin related protein 1, Drp1）依赖的线粒体自噬的影响,探讨LPS制作脓毒症急性肺损伤模型的合适浓度。方法对数生长期A549细胞分为对照组、5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组,5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组分别采用PBS稀释的5、10、25、50 mg/L LPS处理16 h,对照组给予等体积PBS培养16 h。采用Western blot法检测各组细胞坏死性凋亡标志蛋白p-RIP3、RIPK1、p-MLKL和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）-α以及线粒体自噬标志蛋白PINK1、LC3B、Drp1、p-Mfn2相对表达量,并采用JC-1线粒体探针检测线粒体膜电位。结果 10、25、50 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、Drp1、LC3B蛋白相对表达量依次增高（P＜0.05）,且均高于5 mg/L LPS组和对照组（P＜0.05）。10、25、50 mg/L LPS组p-Mfn2蛋白相对表达量（1.043±0.085、0.844±0.085、0.204±0.040）和细胞线粒体膜电位（7.323±0.331、6.429±0.456、4.661±0.456）依次降低（P＜0.05）,且均低于5 mg/L LPS组（1.288±0.035、9.013±0.648）和对照组（2.497±0.440、14.392±1.216）（P＜0.05）。5 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、LC3B蛋白相对表达量高于对照组（P＜0.05）,p-Mfn2蛋白相对表达量和细胞线粒体膜电位低于对照组（P＜0.05）,Drp1蛋白相对表达量与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 10～50 mg/L LPS可诱导肺上皮细胞发生坏死性凋亡,可能与Drp1依赖的线粒体自噬有关;10～50 mg/L LPS可能是建立脓毒症急性肺损伤细胞模型的较合适浓度。
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