【摘 要】
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将集胞藻(Synechocystissp.)PCC6803上psbB的一段序列(从#693bp到#2563bp)插入pBluescriptKS的多克隆位点，构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的ββ基因插入中间载体p
【机 构】
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中国科学院植物研究所,北京大学生命科学学院
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将集胞藻(Synechocystissp.)PCC6803上psbB的一段序列(从#693bp到#2563bp)插入pBluescriptKS的多克隆位点，构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的ββ基因插入中间载体pRL-439上启动子PpsbA的下游，并将pRL-ββ上PpsbA和ββ基因插入pKSB构建成整合表达载体pKSB-ββ。利用自然转化将整合表达载体导入集胞藻6803，并通过单交换同源重组使ββ基因整合到集胞藻6803基因组DNA上。逐步提高氨苄青霉素浓度,筛选得到遗传性状稳定的转基因集胞藻6803。PCR检测转基因集胞藻6803，结果证实ββ基因已整合到集胞藻6803的染色体上；Westernblotting结果表明，ββ基因在转基因集胞藻6803细胞中得到表达，ELISA测定表明在50μmol/L的Zn2+诱导下ββ在新鲜集胞藻6803中的蛋白表达量为0.739mg/g；重金属耐受性实验表明，得到能耐受Cu2+的转基因集胞藻6803。经原子吸收光谱法测定,转基因集胞藻6803在含低浓度Cu2+（10μmol/L）的培养液中对Cu2+的去除率可达到82%。
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