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[摘 要] 目的：测定复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-0.2%磷酸（15∶75），检测波长为256nm，流速为1.0ml/min。结果：金丝桃苷进样量在3.56～71.2μg/ml范围内与峰面积具有良好的线性关系（r=0.999）；平均加样回收率为98.93%，RSD=1.98%（n=6）。结论：该方法稳定、准确，可用于复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷含量测定。
[关键词] 复方罗布麻片Ⅰ；金丝桃苷；高效液相色谱法
[中图分类号]R284.1 [文献标志码] A [文章编号]1007-8517（2015）06-0014-02
复方罗布麻片Ⅰ收载于《化学药品地方标准上升国家标准（第十一册）》，由罗布麻叶、野菊花、防己、硫酸双肼嗪等组成，为中西药复方制剂。方中罗布麻叶具有平肝安神、清热利水之功，对本方发挥临床疗效有重要作用。原标准中未对罗布麻叶进行质量控制。现代药理研究表明，罗布麻叶降血压、降血脂主要活性成分为黄酮类化合物，其中以金丝桃苷含量最高[1]。为有效控制复方罗布麻片Ⅰ的质量，促进临床用药安全，本试验建立了以反相高效液相色谱法测定复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷含量的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津LC-2010A高效液相色谱仪；AE-240型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。
1.2 试药 金丝桃苷对照品（批号：111521-200303，中国药品生物制品检定所）；复方罗布麻片Ⅰ（批号：120802，山西津华晖星制药有限公司；批号：0130201，山西云鹏制药有限公司；批号：121202，山西亨瑞达制药有限公司）；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18（250 × 4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸（15∶75）；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：256nm。在此色谱条件下，供试品色谱图中，以金丝桃苷峰计算，理论板数为10126。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取金丝桃苷对照品适量，加甲醇溶解，制成30μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取复方罗布麻片Ⅰ适量，研细，精密称取约3g，至锥形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工艺，配制不含罗布麻叶的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.5 系统适用性实验 精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各10μl，按照上述色谱条件测定，结果表明阴性对照溶液在对照品溶液的相同保留时间处无杂质峰干扰。对照品色谱图、供试品色谱图、阴性对照色谱图见图1～3。
2.6 线性关系 精密吸取对照品溶液（浓度μg/ml）1、5、10、15、20μl，依法进样，以峰面积积分值为横坐标，对照品进样量为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为：C=4×10-7A-0.0234，r=0.999。试验结果表明，金丝桃苷在3.56～71.2μg范围内呈良好的线性关系。
2.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10μl，分别于0、3、6、9、18h注入液相色谱仪，测得待测成分峰面积积分值的RSD为2.02%，结果表明供试品溶液在18h内基本稳定。
2.8 精密度实验 精密吸取金丝桃苷对照品溶液10μl，重复进样6次，计算得峰面积积分值的RSD为1.82%，表明本法精密度良好。
2.9 重复性试验 精密称取同一样品（批号：121202）6份，按样品测定法测定，结果每g含金丝桃苷分别为0.36、0.35、0.36、0.34、0.36、0.35mg（RSD=2.3%， n=6），表明本法重现性良好。
2.10 加样回收率试验 取复方罗布麻片Ⅰ（批号：121202，金丝桃苷含量为0.35mg/g）6份，精密称定，分别精密加入一定量的金丝桃苷对照品（35.6μg/ml），照供试品测定方法进样测定，计算回收率。结果表明，本方法具有较好的准确度。见表1。
2.11 样品的含量测定 取复方罗布麻片Ⅰ按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，进样10μl记录色谱图峰面积，以峰面积计算样品中金丝桃苷的含量。结果见表2。
3 讨论
本试验比较了用50%甲醇与甲醇加热回流提取的结果，发现用50%的甲醇加热回流法提取效率高于甲醇加热回流提取法。因此，选用50%甲醇作为提取溶媒。
复方罗布麻片Ⅰ为中西药复方制剂。由于其价格便宜，疗效可靠，在高血压病人中得到广泛应用。通过对3批复方罗布麻片Ⅰ样品的测定，发现其中所含金絲桃苷的含量存在较明显的差异。由此可见，对复方罗布麻片Ⅰ中罗布麻叶进行质量控制，很有必要。
参考文献
[1]许虎，刘训红，王媚，等.罗布麻叶研究现状及设想[J].现代中药研究与实践，2012，26（3）：85-87.
[关键词] 复方罗布麻片Ⅰ；金丝桃苷；高效液相色谱法
[中图分类号]R284.1 [文献标志码] A [文章编号]1007-8517（2015）06-0014-02
复方罗布麻片Ⅰ收载于《化学药品地方标准上升国家标准（第十一册）》，由罗布麻叶、野菊花、防己、硫酸双肼嗪等组成，为中西药复方制剂。方中罗布麻叶具有平肝安神、清热利水之功，对本方发挥临床疗效有重要作用。原标准中未对罗布麻叶进行质量控制。现代药理研究表明，罗布麻叶降血压、降血脂主要活性成分为黄酮类化合物，其中以金丝桃苷含量最高[1]。为有效控制复方罗布麻片Ⅰ的质量，促进临床用药安全，本试验建立了以反相高效液相色谱法测定复方罗布麻片Ⅰ中金丝桃苷含量的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津LC-2010A高效液相色谱仪；AE-240型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。
1.2 试药 金丝桃苷对照品（批号：111521-200303，中国药品生物制品检定所）；复方罗布麻片Ⅰ（批号：120802，山西津华晖星制药有限公司；批号：0130201，山西云鹏制药有限公司；批号：121202，山西亨瑞达制药有限公司）；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18（250 × 4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸（15∶75）；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长：256nm。在此色谱条件下，供试品色谱图中，以金丝桃苷峰计算，理论板数为10126。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取金丝桃苷对照品适量，加甲醇溶解，制成30μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取复方罗布麻片Ⅰ适量，研细，精密称取约3g，至锥形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工艺，配制不含罗布麻叶的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.5 系统适用性实验 精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各10μl，按照上述色谱条件测定，结果表明阴性对照溶液在对照品溶液的相同保留时间处无杂质峰干扰。对照品色谱图、供试品色谱图、阴性对照色谱图见图1～3。
2.6 线性关系 精密吸取对照品溶液（浓度μg/ml）1、5、10、15、20μl，依法进样，以峰面积积分值为横坐标，对照品进样量为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为：C=4×10-7A-0.0234，r=0.999。试验结果表明，金丝桃苷在3.56～71.2μg范围内呈良好的线性关系。
2.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10μl，分别于0、3、6、9、18h注入液相色谱仪，测得待测成分峰面积积分值的RSD为2.02%，结果表明供试品溶液在18h内基本稳定。
2.8 精密度实验 精密吸取金丝桃苷对照品溶液10μl，重复进样6次，计算得峰面积积分值的RSD为1.82%，表明本法精密度良好。
2.9 重复性试验 精密称取同一样品（批号：121202）6份，按样品测定法测定，结果每g含金丝桃苷分别为0.36、0.35、0.36、0.34、0.36、0.35mg（RSD=2.3%， n=6），表明本法重现性良好。
2.10 加样回收率试验 取复方罗布麻片Ⅰ（批号：121202，金丝桃苷含量为0.35mg/g）6份，精密称定，分别精密加入一定量的金丝桃苷对照品（35.6μg/ml），照供试品测定方法进样测定，计算回收率。结果表明，本方法具有较好的准确度。见表1。
2.11 样品的含量测定 取复方罗布麻片Ⅰ按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，进样10μl记录色谱图峰面积，以峰面积计算样品中金丝桃苷的含量。结果见表2。
3 讨论
本试验比较了用50%甲醇与甲醇加热回流提取的结果，发现用50%的甲醇加热回流法提取效率高于甲醇加热回流提取法。因此，选用50%甲醇作为提取溶媒。
复方罗布麻片Ⅰ为中西药复方制剂。由于其价格便宜，疗效可靠，在高血压病人中得到广泛应用。通过对3批复方罗布麻片Ⅰ样品的测定，发现其中所含金絲桃苷的含量存在较明显的差异。由此可见，对复方罗布麻片Ⅰ中罗布麻叶进行质量控制，很有必要。
参考文献
[1]许虎，刘训红，王媚，等.罗布麻叶研究现状及设想[J].现代中药研究与实践，2012，26（3）：85-87.